ESFREGAÇO DE SANGUE: CARACTERÍSTICAS, TIPOS, TÉCNICAS E HISTOLOGIA - BIOLOGIA - 2024

O esfregaço de sangue é um esfregaço de sangue periférico utilizado para analisar os componentes presentes na circulação sanguínea. A observação de um esfregaço de sangue fornece dados hematológicos que são muito úteis para o diagnóstico e acompanhamento de muitas patologias.

O esfregaço de sangue permite quantificar o número de diferentes tipos de leucócitos (fórmula leucocitária), bem como analisar a morfologia e o formato dos eritrócitos, leucócitos e plaquetas.

Preparação do esfregaço de sangue. Fonte: Sangue em vidro de laboratório. Public DomainPictures.net

Nele podem ser detectadas anormalidades no número de células, tais como: leucocitose ou leucopenias, linfocitose ou linfopenia, neutrofilia ou neutropenia, trombocitose ou trombocitopenias e eosinofilia. Anormalidades no tamanho e formato das células também podem ser observadas.

Além disso, é possível detectar vários tipos de anemias, leucemias e infecções bacterianas ou parasitárias do sangue.

Para isso, existem vários tipos de esfregaços que são realizados dependendo do objetivo do estudo. Existem manchas finas e espessas. Esses esfregaços diferem na técnica de execução e no objetivo do estudo.

Aqueles com gotas finas são usados ​​como adjuvantes para completar a hematologia. Isso fornece dados sobre a fórmula leucocitária, além da análise da forma e morfologia das três séries de células que compõem o sangue: série vermelha, série branca e plaquetas. Embora também sirvam como complemento ao estudo do esfregaço espesso.

O filme espesso é utilizado para o diagnóstico de doenças causadas por hemoparasitas, como malária ou malária, toxoplasmose, leishmaniose, doença de Chagas, babesiose e microfilariose.

Características de um esfregaço de sangue

Um bom esfregaço de sangue deve atender a certas características. Entre eles podemos citar:

-A amostra deve atender aos requisitos mínimos de qualidade para ser representativa.

-A amostragem deve ser bem executada.

-Execução atempada do esfregaço.

-Se realizado com sangue venoso, use um anticoagulante que não deforme as células e misture o tubo antes de fazer o esfregaço.

-Se for com sangue capilar, descarte a primeira gota.

-A propagação deve ser homogênea. Isso garante que as células sejam distribuídas uniformemente e que as células sanguíneas possam ser bem analisadas quanto à forma e ao número.

-Os lados do esfregaço devem ser lisos do começo ao fim.

-O esfregaço deve respeitar uma margem de 1 a 2 mm nas laterais da lâmina.

-A camada espalhada deve diminuir gradualmente de espessura do início ao fim (mancha de gotas finas pelo método de lâmina).

- Deve ser devidamente rotulado para evitar confusão na amostra.

-Fixe e corar adequadamente para observação clara dos elementos do sangue.

-Deixe o esfregaço secar muito bem antes de montar a preparação no microscópio. Colocar óleo de imersão em um esfregaço úmido causará a formação de micelas que impedem a visualização das células.

Tipos de esfregaço de sangue

Os esfregaços de sangue periférico podem ser classificados em esfregaço fino e esfregaço espesso. Aqueles com uma camada fina são usados ​​para o estudo da fórmula leucocitária e observação morfológica das células sanguíneas. Bactérias extracelulares como borrelia e hemoparasitas intracelulares, como plasmódio, entre outras, também podem ser observadas.

Na bolha fina, podem ser identificadas as espécies do parasita, portanto, é uma técnica mais específica que a bolha grossa, mas a bolha grossa é mais sensível, pois é uma técnica de concentração utilizada para a busca exaustiva de hemoparasitas extracelulares.

Existem dois tipos de esfregaços de gota fina: os realizados em lâminas e os realizados em lamínulas. Os esfregaços espessos são realizados em lâminas.

Técnicas para colher amostras de sangue

O esfregaço de sangue pode ser feito a partir de uma punção capilar ou de uma amostra venosa obtida com anticoagulante. Se for feito de sangue com anticoagulante, o esfregaço pode ser preparado em até 2 horas após a coleta da amostra.

Deve-se ter cuidado ao usar anticoagulantes que não deformam as células sanguíneas. A melhor opção é o EDTA. Ao contrário, o uso de anticoagulantes como o citrato trissódico deve ser evitado.

Se a amostra for colhida por punção capilar, o esfregaço deve ser estendido imediatamente, antes que o sangue coagule.

A primeira gota deve ser descartada, permitindo que a próxima gota escape espontaneamente para evitar a diluição da amostra com fluido de tecido. É a técnica mais recomendada para a observação da morfologia celular, visto que o sangue não possui aditivos.

Para a observação de hemoparasitas, Solari et al., Concluíram em seu trabalho de pesquisa que ambas as técnicas (punção venosa e capilar) são igualmente eficientes.

Tipos de amostra de sangue: A. Punção capilar. B. Punção venosa. Fonte: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Técnicas para preparar o esfregaço de sangue

O esfregaço de sangue pode ser realizado manualmente em lâminas de microscópio ou em uma lamela ou lâmina. Também é possível por meio de equipamentos automatizados.

-Slides esfregaços

É a técnica preferida pela maioria dos laboratórios devido ao seu fácil manuseio.

Usando uma pipeta Pasteur, coloque uma gota de sangue não muito espessa ou muito fina no centro de uma das pontas de uma lâmina de microscópio limpa.

O esfregaço é feito com o auxílio de outra lâmina com ponta retificada. A lâmina de vidro fosco é colocada perpendicularmente à extremidade oposta de onde a gota está localizada.

Ele se inclina em um ângulo entre 30 - 45 ° e desliza em direção à queda; Ao ser tocada, ela se expande linearmente sobre a borda do escorregador e com um movimento constante e definido a folha retorna; antes de chegar ao fim, o slide é levantado.

Desta forma, uma camada homogênea é espalhada sobre a superfície da lâmina receptora.

O esfregaço pode secar. Em seguida, é fixado e tingido com o corante preferido. Deixe secar bem antes de examinar ao microscópio. Uma gota de óleo é colocada no rosto mostrando o esfregaço e observada ao microscópio óptico.

Esfregaço de sangue na lâmina. Imagem superior: esfregaço não manchado. Imagem inferior: esfregaço manchado. Fonte: Coinmac

Partes do esfregaço feitas em lâminas

Neste tipo de esfregaço, três áreas definidas podem ser distinguidas: a cabeça, o corpo e a cauda. A cabeça corresponde ao local onde começa o esfregaço, é a área mais espessa e não é bom observar.

O corpo é a parte central ou intermediária do esfregaço, é a melhor área para se observar ao microscópio, pois ali as células se distribuem uniformemente e sua morfologia está preservada.

A cauda corresponde à parte final do esfregaço; aqui, a distribuição não é mais uniforme e a morfologia eritrocitária tende a se perder.

Controle de qualidade na técnica de slide

Nessa técnica, ela desempenha um papel fundamental:

-Limpeza e desengorduramento da lâmina: garante o bom deslizamento da amostra.

-O tamanho da gota: com gotas muito grandes obter-se-á um esfregaço mais espesso e longo, com uma gota muito pequena a propagação será mais curta e extremamente fina.

-A velocidade aplicada na extensão: quanto menor a velocidade o esfregaço será mais fino, maior a velocidade ele será mais espesso.

-O ângulo de execução: quanto menor o ângulo, mais fino é o esfregaço, quanto maior o ângulo mais espesso.

-Passo na lamela

Não é muito utilizado, pois o manuseio de lamínulas frágeis é incômodo, porém oferece grandes vantagens, pois obtém-se uma melhor distribuição das células ao longo do esfregaço.

Uma gota não muito espessa e não muito fina é colocada no centro de uma lamela. Imediatamente, outra lamela é colocada em cima desta, de modo que as pontas de ambas as lamelas se projetem, formando uma estrela.

A gota se espalhará espontaneamente pela superfície de ambas as lamelas. No final da extensão, cada slide é deslizado para o lado oposto um do outro (um à direita e outro à esquerda) rapidamente.

A técnica fornece dois esfregaços em vez de um.

Eles são colocados para secar com o lado espalhado para cima. Depois de seco, é fixado e tingido com a técnica de escolha. Deixe secar. Uma gota de óleo de imersão é colocada em uma lâmina, o esfregaço é colocado com o lado do esfregaço voltado para baixo e visto ao microscópio.

Controle de qualidade na técnica de lamínula

Para obter um bom esfregaço para esta técnica, é importante:

-Limpeza das lamelas (ajuda a deslizar a amostra suavemente).

-O tamanho da gota (influencia a espessura do esfregaço).

-A velocidade de separação das lamelas (influencia a homogeneidade da propagação).

-Com equipamento automatizado

Eles podem ser feitos por meio de qualquer uma dessas equipes: Spinner e Autoslide.

O Spinner consiste em colocar uma lâmina com uma gota de sangue em uma placa especial de centrífuga. A amostra é centrifugada em altas velocidades; desta forma, é formado um esfregaço homogêneo e fino da amostra. Tem como desvantagem a possibilidade de hemólise da amostra.

O Autoslide é um instrumento que realiza mecanicamente os movimentos para a execução do esfregaço nas lâminas. Você também pode corrigir e manchar o esfregaço. Pode até ser adaptado a alguns contadores de hematologia automáticos.

Técnica de esfregaço espesso

Para pesquisa de hemoparasitas, dois esfregaços são recomendados: um com gota fina e outro com gota grossa.

Faça uma punção capilar, limpe a primeira gota. Coloque uma gota fina em uma lâmina e passe como explicado anteriormente. Para a conta grossa, coloque uma conta grande em outro slide e espalhe em um quadrado de 1,55 mm. Deixe as duas manchas secarem.

Mancha de esfregaço

As tintas Giemsa ou Wright, entre outras, podem ser usadas para gotas finas. A coloração Giemsa ou May-Grunwald Giemsa é recomendada para esfregaços espessos.

Mancha de Giemsa

O esfregaço é fixado por 3 minutos com metanol, drenado e deixado secar novamente. O esfregaço é então coberto com corante Giemsa por 10-15 minutos. É lavado com água destilada e deixado secar. Para observar ao microscópio, uma gota de óleo de imersão é colocada.

Mancha de Wright

O esfregaço é coberto com a mancha de Wright por 5 minutos. Descarte e coloque a solução tampão em pH 6,8 por 6 minutos. Sopre a preparação para homogeneizar. Lave com água destilada e deixe secar. Observe ao microscópio.

Tipos de esfregaços defeituosos

Ocorre em estagiários na técnica de queda fina com slides.

Esfregaços com áreas de diferentes espessuras (finas e espessas intercaladas)

É que o movimento executado não foi constante durante a propagação, fazendo paradas e reinicializações.

Esfregaço muito curto

Eles têm 2 causas: uma é devido ao fato de o escorregador ter sido levantado antes de atingir a outra extremidade do escorregador. Neste caso, é extremamente espesso e curto.

Por outro lado, se o esfregaço for curto mas fino, é porque o tamanho da gota era muito pequeno.

Esfregaço com uma área raked no final do esfregaço

As causas são várias: uma é que a borda retificada está com defeito, que a pressão exercida na rampa receptora é aumentada no momento do espalhamento ou que a borda retificada da rampa está gasta.

Esfregaço com formação de vacúolo ou áreas arredondadas ou elípticas claras

Devem-se ao uso de esfregaços gordurosos (mal lavados e desengordurados).

Esfregaços muito espessos ou muito finos

Gotas muito grandes produzirão esfregaços muito espessos do início ao fim e gotas muito pequenas produzirão esfregaços muito finos.

Histologia

As células sanguíneas podem ser vistas em um esfregaço de sangue. Entre eles estão:

-Eritrócitos ou glóbulos vermelhos

Sangue humano, eritrócitos ou glóbulos vermelhos e dois glóbulos brancos. Retirado e editado de: Viascos. Sua observação é de extrema importância. Nesse nível, podem ser detectadas anemias, talassemia, doenças da medula óssea, etc.

O número de eritrócitos ou glóbulos vermelhos é de aproximadamente 5 x 10 ⁶ mm3 nos homens e 4,5 x 10 ⁶ nas mulheres. Os glóbulos vermelhos têm a forma de discos bicôncavos, com uma palidez fisiológica central. Eles podem ser vistos separadamente (normal) ou formando pilhas de rouleaux (anormais).

Os esfregaços também mostram poiquilocitose (glóbulos vermelhos de várias formas), anisocitose (glóbulos vermelhos de vários tamanhos), anisopoiquilocitose (várias formas e tamanhos), anisocromia (cores diferentes), eritroblastos (glóbulos vermelhos imaturos), microcitose (glóbulos vermelhos menores)) e macrócitos (eritrócitos maiores).

Quando apresentam deficiência na quantidade de hemoglobina e a palidez central aumenta, diz-se que há hipocromia. Quando uma série vermelha normal é observada, ela será relatada como normocítica e normocrômica.

- Células sanguíneas brancas ou leucócitos

Glóbulos brancos

A quantidade normal varia de 5.000 a 10.000 mm ³. Eles são alterados nos processos infecciosos, nas alergias e na leucemia. Vários tipos podem ser distinguidos no esfregaço de sangue, que são explicados a seguir.

Neutrófilos segmentados

Eles representam 55-65% do total de leucócitos. Eles medem entre 10-15 μm. Possuem núcleo segmentado ou lobulado que adota diferentes morfologias, por isso é denominado polimorfonuclear.

Eles têm grânulos neutrofílicos abundantes em seu citoplasma e alguns azurófilos. Eles aumentam em infecções bacterianas (neutrofilia), diminuem em infecções virais (neutropenia).

Podem ser observadas anormalidades morfológicas como pleocariocitose (núcleos hiper-segmentados), arcos (células imaturas) ou macropolices (de formato oval e grande).

Outras alterações:

- Granulações tóxicas

- Neutrófilos Pseudo Pelger (o núcleo não apresenta lobulações ou são bilobados).

-Corpos de Döhle: inclusões citoplasmáticas azuis escuras.

-Aumento da basofilia citoplasmática.

-Vacúolos intracitoplasmáticos.

-Picnose celular (perda de pontes internucleares).

Eosinófilos segmentados

Eles representam 1-3% do total de glóbulos brancos. Eles medem 9-10 μm. São caracterizados pela presença de abundantes grânulos citoplasmáticos acidofílicos e poucos azurófilos. Seu núcleo possui duas lobulações. Seu número aumenta em alergias e doenças de origem parasitária.

Basófilos segmentados

Eles são extremamente raros, representando 0-1% dos leucócitos. Eles medem 10-12μm. O núcleo costuma ser irregular nas margens e pode ser bilobado, mas não é observado devido ao grande número de granulações grosseiras basofílicas em seu citoplasma. Muito raramente, pode ser observada basofilia.

Linfócitos

São pequenas células com citoplasma basofílico, com núcleo, bem definido, redondo, com cromatina condensada. O núcleo abrange quase toda a célula. Eles representam 26-40% dos leucócitos do sangue. Eles aumentam em infecções virais (linfocitose). Linfócitos reativos podem ser vistos.

Monócitos

Células maiores que os linfócitos, com citoplasma maior e núcleos de cromatina ovais mais frouxos. Eles medem 9-12μm. O citoplasma é abundante e geralmente aparece em azul acinzentado claro com as técnicas de coloração padrão. Monócitos vacuolados e monocitose podem ser observados entre as alterações.

-Platelets

Eles medem entre 1,5-3 μm. Sua forma é redonda ou oval. O valor normal varia de 150.000 a 350.000 plaquetas / mm3. Eles podem diminuir em algumas infecções virais. Eles não têm núcleo e são roxos. Anormalidades podem ser observadas nesta série, como macro ou microplaquetas, trombocitose ou trombocitopenia e fragmentos de plaquetas.

Elementos patológicos

Parasitas de sangue

Hemoparasitas, como o agente causador da malária ou malária (parasitas do gênero Plasmodium), podem ser observados em esfregaços de sangue. Por isso, é importante que o esfregaço seja analisado manualmente, já que o equipamento automatizado perde esse achado.

Bactérias

Em patologias como febre recorrente ou doença de Lyme, seu agente causador pode ser observado. Neste caso, corresponde a espiroquetas Borrelia recurrenti e Borrelia burgdorferi no esfregaço de sangue.

Células imaturas

Casos graves são observados em leucemias, reações leucemóides e reações leucoeritroblásticas, entre outros. Nas infecções bacterianas, pode haver ligeiros desvios para a esquerda (presença de bandidos). Eritroblastos também podem ser vistos em algumas anemias.

Referências

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2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Interpretação de laboratório clínico. 8ª Edição. Editorial Médica Panamericana.
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4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Importância do estudo do esfregaço de sangue periférico em idosos. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Disponível em: scielo.sld
5. Grinspan S. O estudo do esfregaço de sangue periférico. Educação médica continuada. Disponível em: bvs.hn/RMH