SIM MÉDIO: FUNDAÇÃO, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O meio SIM é um ágar semissólido e diferencial, especialmente desenvolvido para auxiliar na identificação de algumas bactérias, especialmente Enterobacteriaceae. É composto de tripteína, peptona, sulfato de ferro, sulfato de amônio, tiossulfato de sódio e ágar.

Esse meio permite a execução de três testes importantes: a produção de sulfeto de hidrogênio (H ₂ S), a formação de indol e a motilidade, daí a sigla SIM. Devido à sua grande utilidade, não pode faltar no laboratório de bacteriologia.

A. Meio SIM comercial B. Teste de SIM H2S (-), Indol (-) e Motilidade (+) e SIM H2S (+), Indol (-), Teste de motilidade (+). Fonte: A. Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Ao contrário de outros meios, deve ser semissólido para que a capacidade de movimento de algumas bactérias seja detectável. Nesse sentido, esse teste funciona muito bem para Enterobacteriaceae, mas não em bastonetes Gram-negativos não fermentadores, onde outros métodos são preferidos, como gota suspensa.

O meio SIM permite distinguir certas propriedades específicas que caracterizam algumas bactérias em relação a outras. Por exemplo, Escherichia coli se distingue por ser H ₂ S (-), Indol (+) e motilidade (+), enquanto Proteus mirabilis é H ₂ S (+), indol (-), motilidade (+).

Base

É um meio de cultura considerado diferencial, pois seu uso distingue os microrganismos capazes de produzir sulfeto de hidrogênio daqueles que não o fazem; também destaca aqueles que formam o indol do triptofano daqueles que não o fazem e, finalmente, diferencia as bactérias móveis das imóveis.

Fonte de energia

Como qualquer meio de cultura, possui elementos que fornecem os nutrientes necessários para o desenvolvimento de microrganismos não exigentes. Esses elementos são representados por peptonas e tripteína.

O desenvolvimento do microrganismo no meio é essencial para podermos observar a presença ou ausência das características que este meio avalia.

Produção de sulfeto de hidrogênio

A letra S da sigla SIM refere-se à produção de sulfeto de hidrogênio (H ₂ S). As bactérias capazes de formar sulfeto de hidrogênio absorvem o enxofre do tiossulfato de sódio.

Uma vez formado o H ₂ S -gás incolor, ele reage com o sal de ferro presente no meio, formando sulfeto ferroso, bem visível (precipitado preto). As bactérias que não formam H ₂ S, saem do meio da cor original (bege).

A presença do precipitado preto pode dificultar a interpretação da motilidade. No entanto, mais H ₂ S- Enterobacteriaceae produtoras são conhecidos por serem positivamente meis, tais como Salmonella, Proteus, e Citrobacter. Além disso, o precipitado preto que cobre quase todo o meio sugere motilidade positiva.

Formação de indol

A segunda letra da sigla SIM é "I", que representa a formação do indol.

Nesse sentido, a tripteína, além de fonte de nutriente, cumpre outra função fundamental. Essa peptona é rica em um aminoácido chamado triptofano, portanto, pode apresentar bactérias produtoras de triptofanase.

Essa enzima é responsável pela clivagem do aminoácido triptofano, com a conseqüente formação de indol (substância incolor), ácido pirúvico e amônio.

Por isso, para mostrar essa reação, é necessário adicionar uma substância reveladora (reagente de Ehrlich ou reagente de Kovac). Ambos reagem com o indol, formando uma substância em forma de anel vermelho-fúcsia na superfície do ágar. Se o anel fúcsia aparecer, o teste de indol é interpretado como positivo.

As bactérias que não possuem esta enzima não formarão o anel e isso é interpretado como um teste de indol negativo.

É importante ressaltar que o teste do indol deve ser o último a ser interpretado, pois, uma vez adicionado o reagente, o meio torna-se turvo, dificultando a visualização da motilidade.

Motilidade

Finalmente, a letra "M" da palavra SIM significa mobilidade. Para avaliar a motilidade, esse meio é estrategicamente semissólido, pois essa característica é essencial para podermos observar se há movimento bacteriano ou não. As bactérias que possuem flagelos são aquelas que dão esse teste positivo.

Um teste positivo será evidente quando for observada turbidez, tanto no inóculo inicial, quanto ao redor dele. Enquanto as bactérias não móveis só se desenvolvem no caminho do inóculo inicial.

Preparação

SIM médio

Pesar 30 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e depois aquecida à ebulição, mexendo freqüentemente até a completa dissolução.

Distribuir a mistura em tubos de ensaio com tampas de algodão e autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Remova o suporte de tubos da autoclave e deixe-o solidificar na posição vertical, de modo que o meio tenha a forma de um bloco.

Para sua conservação é mantido na geladeira até o seu uso. O meio preparado deve ter um pH final de 7,3 ± 0,2.

No momento da inoculação do meio, ele deve estar em temperatura ambiente. A cor do meio é bege.

Reagente de Kovac

Meça 150 ml de álcool amílico ou isoamílico ou butílico. (Use um dos três mencionados).

Dissolva 10 g de p-dimetilaminobenzaldeído. Em seguida, adicione lentamente 50 ml de ácido clorídrico concentrado.

O reagente pronto para uso é incolor ou amarelo claro. Deve ser mantido em uma garrafa âmbar e armazenado no refrigerador. Não use se ficar marrom escuro; que indica que ele está danificado. Este reagente é o preferido quando se trata de Enterobacteriaceae.

Reagente de Erlich

Pesar 2 g de p-dimetilaminobenzaldeído e dissolver em 190 ml de álcool etílico absoluto e misturar lentamente com 40 ml de ácido clorídrico concentrado. Armazene da mesma forma o reagente de Kovac. O reagente de Ehrlich é mais usado para bactérias não fermentadoras e anaeróbias.

Formulários

O meio SIM é muito utilizado em laboratórios de bacteriologia. Sua vantagem é que três características essenciais podem ser observadas em um mesmo tubo na identificação de Enterobacteriaceae.

Semeado

A forma correta de semear este meio é utilizando a agulha, com a qual uma porção da colônia pura a ser estudada é retirada e inserida verticalmente no centro do meio. Uma única estocada deve ser realizada. A punção não deve atingir o fundo do tubo, o correto é cobrir apenas dois terços da profundidade.

A repetição do inóculo não é recomendada, pois pode levar a falsas interpretações de motilidade positiva. O meio inoculado é incubado aerobicamente a 37 ° C durante 24 horas.

Concluído o tempo, observa-se se houve ou não produção de H ₂ S e a motilidade é lida. Finalmente o indol é revelado, adicionando 3 a 4 gotas do reagente de Ehrlich ou Kovac, misture delicadamente e interprete.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Controle de qualidade

Como controle de esterilidade, um ou dois tubos são incubados sem inoculação em estufa a 37 ° C por 24 horas. Espera-se que após esse período não haja crescimento ou alteração de cor.

Como controle de qualidade, cepas certificadas conhecidas podem ser usadas, tais como: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Os resultados esperados são: Escherichia coli H ₂ S negativo, indol e motilidade positiva, Enterobacter aerogenes apenas motilidade positiva, Salmonella typhimurium H ₂ S e motilidade positiva, com indol negativo. Proteus vulgar é todos positivos, enquanto Klebsiella pneumoniae e Shigella são todos negativos.

Limitações

-Algumas cepas de Morganella morganii, entre outras cepas, podem produzir um pigmento acastanhado neste meio devido à produção de melanina, isso não deve ser confundido com o precipitado de sulfeto ferroso. Em profissionais inexperientes, essa situação pode gerar falsos positivos na interpretação do teste H ₂ S.

- As bactérias aeróbias estritas só crescem na superfície do tubo, dificultando a interpretação da motilidade.

Referências

1. Laboratórios BD. BBL SIM Medium. 2008. Disponível em: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Médio. Disponível em: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Médio. 2009. Disponível em:
4. Laboratório Brizuela-Lab. SIM médio. Disponível em:.brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. SIM médio. 2015. Disponível em: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Editorial Panamericana SA Argentina.