MICROSCÓPIO DE CAMPO ESCURO: CARACTERÍSTICAS, PEÇAS, FUNÇÕES - BIOLOGIA - 2025

O microscópio de campo escuro é um instrumento óptico especial usado em certos laboratórios. Este é o resultado de uma modificação feita na microscopia de campo claro. A microscopia de campo escuro pode ser realizada por transiluminação ou por epiiluminação.

O primeiro se baseia no bloqueio dos raios de luz que chegam diretamente ao condensador, por meio do uso de dispositivos que se interpõem antes que os raios de luz atinjam o condensador.

Microscópio de campo escuro / Treponemes vistos em microscópios de campo escuro. Fonte: Dietzel65 / Judith Miklossy, Sandor Kasas, Anne D Zurn, Sherman McCall, Sheng Yu e Patrick L McGeer

O campo escuro com luz transmitida permite realçar as estruturas, podendo observar partículas extremamente finas. As estruturas são vistas com alguma refração ou brilho em um fundo escuro.

Já o efeito de epi-iluminação é obtido com luz incidente ou oblíqua. Neste caso, o microscópio deve ser equipado com um filtro especial em forma de meia-lua.

Com a iluminação incidente, as estruturas observadas caracterizam-se por apresentar um efeito visual em alto relevo. Esta propriedade permite destacar as bordas das partículas em suspensão.

Ao contrário da microscopia de campo claro, a microscopia de campo escuro é especialmente útil para visualizar lâminas de afresco contendo partículas suspensas, sem qualquer coloração.

No entanto, tem várias desvantagens, incluindo que não pode ser usado para preparações secas ou preparações coradas. Não tem uma boa resolução. Além disso, para garantir uma boa imagem, a abertura numérica das objetivas não pode exceder a do condensador.

Caracteristicas

A composição do microscópio de campo escuro apresenta modificações importantes em relação ao campo claro, uma vez que os fundamentos de ambas as microscopias são opostos.

Enquanto no campo claro os raios de luz são concentrados de modo que passem diretamente pela amostra, no campo escuro os feixes são espalhados de forma que apenas os feixes oblíquos atinjam a amostra. Estes são então dispersos pela mesma amostra, transmitindo a imagem para a objetiva.

Se você focalizasse um slide sem uma amostra, um círculo escuro seria observado, pois sem uma amostra não há nada para espalhar a luz em direção ao objetivo.

Para obter o efeito desejado no campo visual, é necessário o uso de condensadores específicos, além de diafragmas que auxiliam no controle dos feixes de luz.

Em um campo de visão de campo escuro, os elementos ou partículas em suspensão parecem brilhantes e refrativos enquanto o resto do campo é escuro, criando um contraste perfeito.

Se for utilizada luz oblíqua ou incidente, obtém-se um efeito de borda com alto relevo nas estruturas observadas.

Partes do microscópio de campo escuro

Fonte: amazon.com

-Sistema mecânico

Tubo

É o dispositivo pelo qual a imagem refletida e ampliada pela objetiva viaja até chegar à ocular ou oculares.

Mexer

É o suporte onde se localizam os diferentes objetivos. Os alvos não são fixos, eles podem ser removidos. O revólver pode ser girado de forma que o alvo possa ser alterado quando o operador precisar.

Parafuso macro

Este parafuso é usado para focar a amostra, ele é movido para frente ou para trás para mover a amostra para mais perto ou mais longe do alvo e o movimento é grotesco.

Parafuso micrômetro

O parafuso do micrômetro é movido para frente ou para trás para mover a amostra para mais perto ou mais longe do alvo. O parafuso micrométrico é utilizado para movimentos muito finos ou delicados, quase imperceptíveis. É aquele que atinge o foco final.

Prancha

É o suporte onde o corpo de prova repousará na lâmina. Possui uma abertura central por onde passam os feixes de luz. Quando os parafusos macro e micrômetro são movidos, o palco sobe ou desce, dependendo do movimento do parafuso.

O carro

O carro permite que toda a amostra seja percorrida com a objetiva. Os movimentos permitidos são para frente e para trás e vice-versa, e da esquerda para a direita e vice-versa.

Segurando uma pinça

Eles estão localizados no palco, são feitos de metal e destinam-se a segurar o slide para evitar que role durante a observação. É importante que a amostra permaneça fixa enquanto está sendo observada. Os fechos têm o tamanho exato para receber o slide.

Braço ou punho

O braço une o tubo com a base. É o lugar onde o microscópio deve ser segurado quando vai ser movido de um lado para o outro. Com uma das mãos, o braço é agarrado e a base é segurada com a outra.

Base ou pé

Como o próprio nome indica, é a base ou suporte do microscópio. Graças à base, o microscópio pode permanecer fixo e estável em uma superfície plana.

-Sistema óptico

metas

Eles são de forma cilíndrica. Eles têm uma lente na parte inferior que amplia a imagem que vem da amostra. Os objetivos podem ser de várias ampliações. Exemplo: 4,5X (lupa), 10X, 40X e 100X (objetiva de imersão).

A objetiva de imersão tem esse nome porque requer a colocação de algumas gotas de óleo entre a objetiva e a amostra. Os outros são chamados de alvos secos.

As objetivas são impressas com as características que possuem.

Exemplo: marca do fabricante, correção de curvatura de campo, correção de aberração, ampliação, abertura numérica, propriedades ópticas especiais, meio de imersão, comprimento do tubo, comprimento focal, espessura da lamela e anel de código cor.

As lentes têm uma lente frontal localizada na parte inferior e uma lente traseira localizada na parte superior.

Oculares

Os microscópios antigos são monoculares, ou seja, têm apenas uma ocular, e os microscópios modernos são binóculos, ou seja, têm duas oculares.

As oculares são cilíndricas e de formato oco. Estes possuem lentes convergentes internas que expandem a imagem virtual criada pela lente.

A ocular se junta ao tubo. Este último permite que a imagem transmitida pela objetiva chegue à ocular, que a ampliará novamente.

A ocular em sua parte superior contém uma lente denominada ocular e em sua parte inferior abriga uma lente denominada coletor.

Também possui um diafragma e, dependendo de onde estiver localizado, terá um nome. Aquelas que estão localizadas entre as duas lentes são chamadas de ocular Huygens e se estiverem localizadas após as 2 lentes são chamadas de ocular de Ramsden. Embora existam muitos outros.

A ampliação da ocular varia entre 5X, 10X, 15X ou 20X, dependendo do microscópio.

É através da ocular ou oculares que o operador pode visualizar a amostra. Alguns modelos vêm com um anel na ocular esquerda que é móvel e permite o ajuste da imagem. Este anel ajustável é denominado anel de dioptria.

-Sistema de luz

Luminária

É a fonte de iluminação e está localizada na parte inferior do microscópio. A luz é halógena e é emitida de baixo para cima. Em geral, a lâmpada que os microscópios possuem é de 12 V.

Diafragma

O diafragma dos microscópios de campo escuro não tem íris; neste caso, isso evita que os raios vindos da lâmpada atinjam a amostra diretamente, apenas os feixes oblíquos tocarão a amostra. Os feixes que estão dispersos pelas estruturas presentes na amostra são aqueles que vão passar o alvo.

Isso explica por que as estruturas parecem brilhantes e luminosas em um campo escuro.

Condensador

O condensador de um microscópio de campo escuro difere daquele de um campo claro.

Existem dois tipos: capacitores refrativos e capacitores de reflexão. Este último, por sua vez, é dividido em duas categorias: parabolóides e cardióides.

Capacitores de refração

Este tipo de condensador possui um disco que se interpõe para refratar os raios de luz, podendo estar localizado acima da lente frontal ou na parte posterior.

É muito fácil improvisar um condensador deste tipo, pois basta colocar na frente da lente frontal do condensador um disco de papelão preto menor que a lente (diafragma).

Um microscópio de campo claro pode ser convertido em um microscópio de campo escuro usando esta ponta.

Capacitores de reflexão

Eles são os usados ​​por microscópios estereoscópicos. Existem dois tipos: parabolóides e cardióides.

• Parabolóides: eles têm um tipo de curvatura chamada parabolóide devido à sua semelhança com uma parábola. Este tipo de condensador é amplamente utilizado no estudo da sífilis, pois permite observar os Treponemes.
• Cardióide: a curvatura do condensador é semelhante a um coração, daí o nome "cardióide", com o condensador com o mesmo nome. Possui um diafragma ajustável.

Recursos

-É usado para investigar a presença de Treponema pallidum em amostras clínicas.

-Também é útil observar Borrelias e Leptospiras.

-É ideal para observar o comportamento in vivo de células ou microrganismos, desde que não seja necessário detalhar estruturas específicas.

-É ideal para destacar a cápsula ou a parede dos microrganismos.

Vantagem

-Os microscópios de campo escuro com condensador refrativo são mais baratos.

-Seu uso é muito útil na ampliação de 40X.

-São ideais para observar amostras com índice de refração semelhante ao meio em que se encontram. Por exemplo, células em cultura, leveduras ou bactérias móveis como as espiroquetas (Borrelias, Leptospiras e Treponemas).

-A célula pode ser observada in vivo, o que permite avaliar seu comportamento. Por exemplo, movimento browniano, movimento por flagelo, movimento por emissão de pseudópodes, processo de divisão mitótica, eclosão de larvas, brotamento de leveduras, fagocitose, entre outros.

-Permite destacar as bordas das estruturas, por exemplo a cápsula e a parede celular.

-É possível analisar partículas desagregadas.

-O uso de corantes não é necessário.

Desvantagens

-Cuidado especial na montagem dos preparados, pois se forem muito espessos não serão bem observados.

-A resolução das imagens é baixa.

-Os microscópios de campo escuro que usam condensadores refrativos têm uma porcentagem muito baixa de luminosidade.

-Para melhorar a qualidade da imagem com uma objetiva de imersão (100X) é necessário reduzir a abertura numérica das objetivas e assim aumentar a do cone de iluminação. Para isso, é imprescindível a incorporação de um diafragma adicional que possa regular a abertura numérica da objetiva.

-Você não pode visualizar preparações secas ou preparações coloridas, a menos que sejam corantes vitais.

-Não permite a visualização de certas estruturas, principalmente as internas.

-Os microscópios de campo escuro são mais caros.

Referências

1. "Microscópio de campo escuro." Wikipédia, a enciclopédia livre. 26 de agosto de 2018, 00h18 UTC. 30 de junho de 2019, 01:06
2. Agudelo P, Restrepo M, Moreno N. Diagnóstico de leptospirose a partir de amostras de sangue e cultura por observação ao microscópio de campo escuro. Biomédico. 2008; 28 (1): 7-9. Disponível em: scielo.org
3. Rodríguez F. Tipos de microscópios ópticos. Blog do Laboratório Clínico e Biomédico. Disponível em: franrzmn.com
4. Colaboradores da Wikipedia. Microscopia de campo escuro. Wikipédia, a enciclopédia livre. 19 de outubro de 2018, 00h13 UTC. Disponível em: wikipedia.org
5. Bhatia M, Umapathy B, Navaneeth B. Uma avaliação de microscopia de campo escuro, cultura e kits sorológicos comerciais no diagnóstico de leptospirose. Indian J Med Microbiol. 2015; 33 (3): 416-21. Disponível em: nlm.nih.gov