SAFRANIN: CARACTERÍSTICAS, USO, TÉCNICAS, TOXICIDADE - QUÍMICA - 2025

A safranina é um corante meriquinoide, assim denominado por sua estrutura química possuindo dois anéis benzenoides e de 2 anéis quinóides, sendo estes últimos os que fornecem a cor vermelha.

É também chamada de dimetil safranina ou vermelho básico 2 em sua forma abreviada, pois seu nome científico é 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenazíniocloro dimetil safranina e a fórmula química é C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Estrutura química da safranina indicando anéis benzenoides e quinóides / Solução aquosa de safranina. Fonte: NEUROtiker editado por MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Existe uma variante chamada trimetil-safranina, mas não há diferença significativa entre as duas substâncias.

A safranina é um corante monocromático e, dependendo das características da fórmula química, é uma substância carregada positivamente. Portanto, ele tem afinidade com estruturas carregadas negativamente. Essas estruturas serão manchadas de vermelho.

Esta propriedade confere aplicabilidade em muitas técnicas histológicas para corar várias estruturas celulares, tanto em organismos eucarióticos como procarióticos.

A safranina é usada como corante de contraste em técnicas importantes e bem conhecidas para uso rotineiro em bacteriologia. Essas técnicas são: coloração de Gram-Hucker, coloração de Schaeffer Fulton para esporos ou coloração de cápsulas bacterianas, entre outras.

Caracteristicas

A cor do açafrão (especiaria obtida a partir dos estigmas da flor do Crocus sativus) inspirou o nome desse corante. Do termo açafrão vem o nome de safranina. Isso se deve à grande semelhança entre a cor do açafrão e a coloração que esse corante proporciona.

A safranina está disponível na forma de cristais ou pó, sendo ambas as apresentações solúveis em água. O corante safranina é inodoro. Mancha as estruturas de vermelho. As estruturas que atraem o corante safranina são chamadas de safranófilos.

Estruturalmente, a safranina é complexa, possui dois anéis benzenoides nas extremidades e no centro estão localizados os dois anéis quinóides onde se encontra o cátion N ⁺. O centro da estrutura é o sistema encarregado de fornecer a cor. Devido a essa característica, este corante está classificado na categoria II.

Usar

Safranin é usado para tingir várias estruturas. Destaca especialmente as células de Kulchitsky presentes no trato gastrointestinal, também chamadas de células enterocromafins.

É capaz de manchar microrganismos pertencentes à família Rickettsiaceae. Da mesma forma, é utilizado em várias técnicas, como no método Koster, uma modificação usada para corar bactérias do gênero Brucella.

Por outro lado, a safranina é usada na técnica de coloração de esporos de Schaeffer Fulton e na coloração de Gram-Hucker. Em ambas as técnicas, a safranina funciona como um corante de contraste.

No primeiro, os esporos assumem a cor verde malaquita e as demais estruturas são vermelhas pela safranina. Na segunda fase, as bactérias Gram negativas perdem a cor do cristal violeta na etapa de descoloração, portanto, a safranina é a que mancha de vermelho as bactérias Gram negativas.

Além disso, a safranina é usada em bacteriologia para preparar meio de ágar Brucella com uma diluição de safranina 1: 5000. Este meio serve para diferenciar a espécie Brucella suis do resto da espécie. Brucella melitensis e Brucella abortus crescem neste meio, mas B. suis é inibida.

Na área agroindustrial, a safranina tem sido utilizada a 2,25% e diluída em 1:10 para tingir amostras do caule da cana-de-açúcar.

Esta planta é comumente afetada pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, que danifica o xilema da planta. As hastes coradas são avaliadas para determinar a função dos vasos do xilema.

Técnicas na área de bacteriologia

Coloração de Castañeda para coloração r

Um esfregaço de sangue ou tecido é colocado em uma solução tampão (tampão fosfato pH 7,6). Deixe secar espontaneamente e cubra com azul de metileno por 3 minutos e faça uma contracoloração com safranina. As rickettsias são coloridas de azul, contrastando com o fundo vermelho.

Coloração de Koster modificada para

Um esfregaço é feito e inflamado no isqueiro para fixação. Posteriormente, é coberto com uma mistura de 2 partes de safranina aquosa saturada com 3 partes de solução de KOH 1 mol / L, durante 1 minuto. É lavado com água destilada e contrastado com azul de metileno carbólico 1%.

Se a amostra contiver bactérias do gênero Brucella, elas serão laranja sobre fundo azul.

Coloração da cápsula bacteriana

Uma mistura de suspensão bacteriana é feita com tinta da Índia e safranina é adicionada. Sob o microscópio, um halo avermelhado será visto ao redor de cada cápsula bacteriana com um fundo preto.

Coloração de esporo

A propagação é feita com a suspensão bacteriana. Em seguida, é fixado ao calor. É recoberto com 5% de verde malaquita, flamejando freqüentemente até a emissão de vapores. O processo é repetido por 6 a 10 minutos. Por fim, é lavado com água e contrastado com safranina 0,5% por 30 segundos. Os bacilos ficam vermelhos e os esporos verdes.

Coloração de Gram-Hucker

Um esfregaço é feito com suspensão bacteriana e fixado no calor. Cubra a lâmina com violeta de cristal por 1 minuto. Em seguida, o lugol é colocado como uma solução mordente por 1 minuto. Posteriormente, é branqueado com álcool acetona e finalmente contrastado com safranina por 30 segundos.

As bactérias Gram positivas coram de vermelho o violeta azulado e as Gram negativas de vermelho.

Alguns laboratórios deixaram de usar a técnica de Gram-Hucker para adotar a técnica de Gram-Kopeloff modificada. Neste último, a safranina é substituída pela fucsina básica. Isso ocorre porque a safranina cora fracamente as espécies dos gêneros Legionella, Campylobacter e Brucella.

Técnicas na área de histologia

Coloração de células de Kulchitsky (enterocromafinas)

Cortes de tecido do trato gastrointestinal são corados com cloreto de prata. Em seguida, é descolorado com tiossulfato de sódio e finalmente contrastado com safranina.

As células de Kulchitsky são diferenciadas pela presença de grânulos marrom-escuros.

Mancha de osteoartrite

Como a safranina tem carga positiva, ela se liga muito bem aos grupos carboxila e sulfato dos glicosaminoglicanos. Fazem parte dos proteoglicanos que constituem a cartilagem articular. Nesse sentido, ao se colorir com safranina O, é possível identificar se há ou não perda de cartilagem.

A perda de tecido cartilaginoso pode ser medida usando a escala de Mankin ou também chamada de escala de osteoartrite.

A técnica é explicada a seguir: o corte histológico é imerso em uma bandeja com solução de hematoxilina férrica de Weigert, depois passado por álcool ácido e lavado com água.

Continue o processo de coloração mergulhando a folha em verde rápido, é lavada com ácido acético e agora é imersa em safranina O. Para finalizar o processo é desidratada com álcoois em diferentes concentrações em ordem crescente. A última etapa requer xileno ou xileno para a amostra clarear.

As lâminas são acondicionadas com bálsamo do Canadá ou similar para serem observadas ao microscópio.

Com essa técnica, os núcleos são tingidos de preto, o osso verde e a cartilagem onde os proteoglicanos se encontram de vermelho.

Mancha para identificação de macroalgas

Pérez et al em 2003 propuseram uma técnica simples e barata para tingir macroalgas. As amostras são preparadas em cortes histológicos de parafina. Os cortes são fixados com glicerina a 1%, permitindo que sequem completamente. Em seguida, é colocado em xilol para remoção da parafina.

A seção é reidratada passando por uma série de bandejas contendo etanol em diferentes graus de concentração (ordem decrescente), por 2 min em cada uma.

Em seguida, é corado por 5 minutos com mistura 3: 1 de safranina 1% com azul de toluidina 1%, ambos preparados com etanol 50%. Três gotas de ácido pícrico são adicionadas à mistura, que atua como um mordente.

Em seguida, é desidratado passando novamente pelas bandejas de álcool, mas desta vez de forma ascendente. Por fim, é lavado com xilol e a amostra é preparada com bálsamo do Canadá para ser observada.

Toxicidade

Felizmente, a safranina é um corante que não representa perigo para quem o manuseia. É um corante inofensivo, não é cancerígeno e não é inflamável.

O contato direto com a pele ou mucosa pode causar uma leve vermelhidão na área, sem maiores complicações. Para isso, recomenda-se lavar a área afetada com bastante água.

Referências

1. García H. Colorante safranina O. Técnico em saúde, 2012; 1 (2): 83-85. Disponível em: medigraphic.com
2. Coloração Gil M. Gram: base, materiais, técnica e usos. 2019. Disponível em: lifeder.com
3. Coloração de Gil M. Spore: justificativa, técnicas e usos. 2019. Disponível em: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipédia, a enciclopédia livre. 7 de março de 2017, 10:39 UTC. 3 de agosto de 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Técnica de coloração útil na interpretação anatômica de Gracilariopsis tenuifrons e Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponível em: scielo.org.
6. Igreja de Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relação da funcionalidade dos vasos do xilema e presença de Leifsonia xyli subsp. xyli. Proteção Rev. Veg. 2007; 22 (1): 65-65. Disponível em: scielo.sld