AGAR BAIRD PARKER: BASE, PREPARAÇÃO E USO - BIOLOGIA - 2025

O ágar Baird Parker é um meio sólido de cultura seletiva e diferencial. Foi criado em 1962 para a detecção e contagem de estafilococos coagulase positivos (Staphylococcus aureus).

É composto por hidrolisado pancreático de caseína, extrato de carne, extrato de levedura, cloreto de lítio, glicina, piruvato de sódio, telurito de potássio, ágar e emulsão de gema de ovo.

Colônias típicas de Staphylococcus aureus em ágar Baird Parker. Fonte: Daizy John

O Baird Parker Agar é baseado na capacidade do S. aureus de reduzir a telurita e produzir lecitinase. Ambas as propriedades geram uma colônia com características específicas para esta espécie. Portanto, é altamente eficaz na detecção desse microrganismo.

As colônias típicas de S. aureus são pretas ou cinza escuro, com uma borda incolor e um halo claro que as circunda, diferenciando-as de outros microrganismos. Este patógeno pode ser encontrado em amostras clínicas, águas, cosméticos e alimentos crus ou cozidos.

O seu diagnóstico ou detecção é de extrema importância, devido à variedade de patologias que produz, como intoxicações alimentares, síndrome da pele escaldada, síndrome do choque tóxico, abscessos, meningites, septicemia, endocardite, entre outras.

Base

Poder nutritivo

Hidrolisado de caseína pancreática, extrato de carne e extrato de levedura são as fontes de nutrientes, vitaminas e minerais necessários para o desenvolvimento microbiano geral, enquanto o piruvato e a glicina são compostos que suportam o crescimento específico de Staphylococcus aureus.

Seletivo

O Baird Parker Agar é seletivo porque contém substâncias que inibem o crescimento da flora que o acompanha, enquanto promove o desenvolvimento de S. aureus. Os compostos inibidores são cloreto de lítio e telurito de potássio.

Diferencial

Este meio permite diferenciar S. aureus do resto dos estafilococos coagulase negativos. S. aureus tem a capacidade de reduzir o telurito a telúrio preto metálico livre, formando colônias pretas ou cinza escuro.

Da mesma forma, a gema de ovo fornece os substratos para demonstrar a presença das enzimas lecitinase e lipase. S. aureus é lecitinase positivo e, portanto, um halo claro será observado ao redor da colônia, indicando que a lecitina foi hidrolisada.

Nesse sentido, o aparecimento neste ágar de colônias pretas brilhantes ou cinza escuro com um halo claro ao redor indica a presença de S. aureus.

Se uma zona de precipitação se formar, isso é indicativo de atividade da lipase. Algumas cepas de S. aureus são lipase positivas e outras negativas.

No caso de S. aureus ser lipase positivo, será observada uma área opaca ao redor da colônia preta ou cinza escuro e, em seguida, um halo claro devido à ação da lecitinase.

Colônias de bactérias diferentes de S. aureus capazes de crescer neste meio desenvolverão colônias incolores ou marrons sem halo circundante.

As colônias pretas atípicas também podem ser vistas com ou sem uma borda incolor, mas sem um halo de luz. Essas colônias não devem ser levadas em consideração, pois não correspondem a S. aureus.

Preparação

Emulsão de gema de ovo

Pegue um ovo de galinha fresco, lave bem e coloque em álcool 70% por 2 a 3 horas. O ovo é então aberto assepticamente e a clara é cuidadosamente separada da gema. A seguir, 50 ml da gema são retirados e misturados com 50 ml de solução fisiológica estéril.

Telurito de potássio 1% w / v

Algumas casas comerciais vendem telurito de potássio a 1% pronto para uso. É adicionado ao meio antes que ele se solidifique.

Para preparar esta solução em laboratório, 1,0 g de telurito de potássio é pesado e dissolvido em uma parte de água. Posteriormente, a quantidade de água é completada até atingir 100 ml. A solução deve ser esterilizada pelo método de filtração.

Preparação do meio de cultura

Pesar 60 g do meio desidratado e dissolver em 940 ml de água destilada. Deixe a mistura descansar por aproximadamente 5-10 minutos.

Aplique calor mexendo o meio frequentemente para melhorar o processo de dissolução. Deixe ferver por um minuto. Esterilize na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe repousar até atingir a temperatura de 45 ° C e adicione 50 ml da emulsão de gema de ovo e 10 ml de telurito a 1%. Misture bem e despeje 15-20 ml em placas de Petri estéreis.

Deixe solidificar, encomende invertido em plaquetas e guarde na geladeira até o uso.

O pH final do meio preparado deve ser 6,8 ± 0,2.

Antes de semear uma amostra, espere a placa atingir a temperatura ambiente. Semeie as placas com listras ou semeadura superficial com uma espátula Drigalski.

A cor do meio desidratado é castanho claro e a cor do meio preparado é âmbar claro.

Usar

Amostras clínicas

As amostras clínicas são semeadas diretamente, descarregando-se parte do material em uma das extremidades da placa, e daí é semeado por exaustão. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.

Amostras de alimentos

Pesar 10 gr da amostra de alimento e homogeneizar em 90 ml de água peptonada 0,1%, a partir daí são preparadas diluições se necessário. Inocular as placas em triplicado com 0,3 ml das soluções preparadas e semear na superfície com uma espátula Drigalski. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.

Esta metodologia permite contar as colônias típicas obtidas e é ideal quando se suspeita da presença de S. aureus acima de 10 UFC por g / ml de amostra.

Se houver suspeita de que a quantidade de S. aureus seja pequena ou houver muita flora associada, sugere-se enriquecer a amostra em caldo de tripticase de soja com NaCl 10% e piruvato de sódio 1%. Isso irá promover o crescimento de S. aureus e inibir o desenvolvimento da flora que o acompanha. Tubos turvos são semeados em ágar Baird Parker.

Amostras de água

Em um sistema de filtração a vácuo esterilizado, 100 ml da água do estudo são filtrados e, subsequentemente, a membrana microporosa de 0,4 mícron é removida com uma pinça estéril e colocada em uma placa Baird Parker. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C. Esta técnica permite a contagem de colônias típicas de S. aureus.

Controle de qualidade

As cepas conhecidas, como Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071 podem ser usadas para avaliar a qualidade do ágar Baird Parker.

No caso das cepas de S. aureus ATCC, sabe-se que reduz a telurita e são positivas para lipase e lecitinase. Portanto, deve haver um desenvolvimento satisfatório e crescer colônias convexas com centro preto e borda incolor, com halo opaco e halo externo claro.

Por sua vez, S. epidermidis deve se desenvolver mal neste meio, com colônias cinza-acastanhadas a pretas, sem um halo claro.

Para E. coli e P. mirabilis, espera-se que seja total ou parcialmente inibido. Em caso de crescimento, as colônias marrons se desenvolverão sem uma área opaca ou um halo claro.

recomendações

-O meio não deve ser aquecido depois de adicionar o telurito e a gema de ovo.

-O preparo da emulsão de gema de ovo e sua adição no meio é uma etapa muito vulnerável à contaminação. Extremo cuidado deve ser tomado.

-Se houver presença de colônias típicas de S. aureus, deve-se confirmar por meio da realização de um teste de coagulase na referida cepa.

-Se houver resultados duvidosos com a coagulase, outros testes confirmatórios devem ser montados.

-Tenha cuidado para não confundir a presença de colônias típicas de S. aureus com colônias pretas atípicas.

Referências

1. Colaboradores da Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipédia, a enciclopédia livre. 15 de março de 2017, 19:36 UTC. Disponível em: wikipedia.org/ Acessado em 18 de fevereiro de 2019.
2. Laboratórios BD. Baird Parker Agar. 2006. Disponível em: bd.com
3. Britannia Laboratories. Base de ágar Baird Parker. 2015. Disponível em: britanialab.com
4. Laboratórios Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Disponível em:
5. Britannia Laboratories. Telurito de potássio. 2015. Disponível em: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carriage of enterotoxigenic Staphylococcus aureus type A, em esfregaços nasofaríngeos em manipuladores de alimentos. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
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