AGAR NUTRITIVO: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O nutriente ágar é um meio não seletivo e sem diferencial de cultura sólida. Todos os tipos de bactérias que não são exigentes do ponto de vista nutricional crescem neste meio.

É um meio simples e, apesar do nome, contém um valor nutricional inferior em comparação com outros meios semelhantes, como o Ágar de Infusão Cérebro e Coração ou o Ágar de Soja Trypticase.

Contagem de colônia com ágar nutriente

Sua utilidade em laboratório é muito variada. É utilizado principalmente para a subcultura de espécies, manutenção de cepas, contagem de colônias, base para o preparo de ágar sangue, entre outros.

Da mesma forma, devido à sua cor bege claro, distingue-se excepcionalmente a produção de pigmentos gerados por algumas cepas bacterianas, como o pigmento esverdeado de Pseudomonas aeruginosa, o pigmento vermelho tijolo produzido por Serratia marcescens em temperatura ambiente, o pigmento amarelo dourado de Staphylococcus aureus, entre outros.

Além disso, é uma das mídias de cultivo mais baratas do mercado.

Base

Como já mencionado acima, é um meio muito simples que se baseia em fornecer nutrientes para o crescimento bacteriano sem restrições e sem reações complexas para interpretar.

Como o meio é translúcido, é ideal para contagem de colônias pelo método de semeadura em profundidade.

Composição

É composto principalmente de extrato de carne ou extrato de levedura, peptonas ou gelatina de digestão pancreática, ágar-ágar, cloreto de sódio e água destilada.

O extrato de carne ou fermento e as peptonas representam as fontes essenciais de carbono e minerais (nitrogênio, fósforo e enxofre), que serão utilizados pelas bactérias como fonte de energia e fatores de crescimento.

Da mesma forma, o ágar-ágar é a base de todos os meios de cultura sólidos, vindo a substituir a gelatina, que foi o primeiro composto base usado por Robert Koch para dar consistência sólida aos seus meios.

O ágar é um polissacarídeo composto por galactose, galactomanana, agarose e agaropectina. Assenta a 40 ° C e derrete perto de 100 ° C.

Por sua vez, o cloreto de sódio fornece ao meio a osmolaridade necessária ao desenvolvimento bacteriano.

Por fim, a água serve para hidratar e dissolver os compostos liofilizados. Água destilada ajustada para pH neutro deve ser usada. A água da torneira não deve ser usada porque contém cálcio e magnésio que podem reagir com os fosfatos do meio e formar sais insolúveis.

Preparação

Para um litro de ágar nutriente, 31 g do meio desidratado devem ser pesados. Coloque em um frasco e dissolva em um litro de água destilada. Após 5 minutos de repouso, aqueça sobre uma fonte de calor e misture constantemente até ferver por 1 ou 2 minutos.

Preparação do meio de cultura.

O frasco é então colocado em uma autoclave e esterilizado a 121 ° C por 20 minutos.

Esterilização em autoclave

Ao final do tempo, é retirado da autoclave e servido em placas de Petri estéreis, utilizando capela de fluxo laminar ou bico de Bunsen.

Se as placas de Petri forem descartáveis ​​(de plástico), o meio deve ser distribuído quando o ágar estiver com temperatura de aproximadamente 50 ° C, para evitar que sejam deformadas pelo calor excessivo.

Deixe solidificar e guarde em um suporte de placa invertido e leve à geladeira de 2-8 ° C até o uso.

As placas devem ser temperadas antes de serem semeadas. As placas de ágar com nutrientes não devem ser usadas se estiverem contaminadas ou desidratadas.

O pH do meio preparado deve ser ajustado para 7,3 ± 0,2.

Formulários

É o meio de cultura mais simples usado no laboratório de microbiologia. Sua formulação é excelente para o crescimento de bactérias não exigentes.

Seus principais usos são explicados a seguir:

Como base para a preparação de ágar sangue

Este meio às vezes é usado como base para preparar ágar sangue, no entanto, não é a base mais comumente usada.

Estimular a esporulação de bactérias formadoras de esporos

Este meio de cultura é especialmente útil para estimular a esporulação de bactérias formadoras de esporos, como Bacillus sp.

Para isso, uma linhagem do gênero Bacillus é semeada e incubada por 24 horas a 37 ° C em aerobiose. Após o crescimento das colônias, a placa é submetida ao estresse de temperatura, ou seja, a temperatura do forno é elevada para 44 ° C e deixada por mais 24 horas ou colocada na geladeira por 24 horas.

No final do tempo, esfregaços da cultura são feitos e corados com coloração de Gram ou com coloração de esporos de Shaeffer-Fulton. Bacilos com endosporos (esporos dentro do bacilo) e exosporos (esporos fora do bacilo) serão observados neles.

Manutenção de tensão

Alguns laboratórios de investigação ou laboratórios de apoio ao ensino universitário requerem a manutenção de bactérias viáveis ​​de importância clínica durante o maior tempo possível, de forma a utilizar o banco de bactérias (bacterioteca) para trabalhos de investigação ou preparação de práticas pedagógicas, onde o Os alunos aprenderão a manipular e identificar esses microorganismos.

O ágar nutriente, bem como o ágar de infusão cérebro-coração, podem ser usados ​​para esse fim. O ágar é preparado, despejado em tubos com tampa de baquelite e inclinado sobre uma base, de forma que o ágar se solidifique formando um bloco no fundo e um bisel na superfície (bico do canal).

Cada tubo é rotulado com o nome da bactéria a ser semeada e a data. Cada uma das bactérias será semeada no bisel e incubada por 24 horas.Após o crescimento das colônias, os tubos são armazenados em temperatura ambiente.

A bacterioteca deve ser renovada de 1 a 3 meses, para evitar contaminação e desidratação do meio e também a morte da bactéria.

Apenas bactérias não seletivas podem ser mantidas dessa maneira.

Contagem de colonias

Embora existam meios especializados para a contagem de colônias, como o ágar de contagem padrão, o ágar nutriente pode ser usado para esse propósito, seja por semeadura superficial com uma espátula drigalski ou em profundidade. Por isso, é muito útil na análise microbiológica de alimentos e água.

Executando testes de diagnóstico

Por ser um meio que não contém sangue ou qualquer outro aditivo, é ideal para colher colônias cultivadas neste meio para realizar o teste de catalase.

Da mesma forma, devido à sua cor clara, é indicado a realização de testes de oxidase diretamente na área do ágar semeado, sem interferência.

Recuperação de aeróbios mesófilos de águas salgadas recreativas (praias)

O ágar nutriente preparado com 10% de água do mar é útil para a avaliação de aeróbios mesófilos em águas de praia.

Desta forma, pode-se avaliar o real nível de contaminação que as águas apresentam com esses microrganismos, uma vez que neste tipo de amostras os resultados se sobrepõem quando são utilizados meios de cultura preparados da forma convencional.

Isso foi demonstrado por Cortez et al. em 2013 em um trabalho de pesquisa.

Isso pode ser explicado pela mudança abrupta que as bactérias sofrem ao passar de um ambiente hipersal para um com baixo teor de sal, pois os microrganismos entram em um estado de letargia em que são viáveis, mas não cultiváveis.

Referências

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