TESTES CRUZADOS: PARA QUE SERVEM, TÉCNICA, JUSTIFICATIVA, FASES - MEDICAMENTO

O Crossmatch é uma série de estudos de laboratório realizados para determinar se os produtos sanguíneos de um doador (principalmente sangue total e globular compactado) são compatíveis com o sangue do receptor.

É um teste complementar adicional para compatibilidade ABO e fator Rh. A razão para a prova cruzada é que às vezes dois indivíduos (doador-receptor) podem ter o mesmo grupo ABO e Rh, mas ainda assim seu sangue é incompatível.

Fonte: unsplash.com

Essa incompatibilidade se deve à presença de anticorpos contra uma série de proteínas dos glóbulos vermelhos conhecidas como antígenos menores. Esses antígenos não são testados rotineiramente, pois são para grupo sanguíneo (ABO) e fator Rh.

Isso porque os antígenos menores são muito menos frequentes e têm expressão variável em cada indivíduo, portanto é praticamente impossível agrupá-los em categorias como se faz com o grupo e o fator Rh.

Em vez disso, os glóbulos vermelhos do doador são misturados com o soro do paciente (teste de correspondência principal) e os glóbulos vermelhos do paciente com o soro do doador (teste de correspondência menor) para detectar a presença de reações antígeno-anticorpo.

Quando há anticorpos contra antígenos menores, tanto no soro do paciente quanto no do doador, o teste é considerado positivo; portanto, na maioria dos casos, aquela unidade específica de sangue não pode ser transfundida.

Grupo ABO

Para entender completamente do que se trata as reações cruzadas, primeiro você precisa conhecer os fundamentos dos grupos sanguíneos.

Nesse sentido, o mais importante é saber que o sangue pode ser classificado em quatro grupos: A, B, AB e O.

Cada um desses grupos expressa uma proteína particular (antígeno) na superfície das hemácias, que é identificada como um elemento estranho pelos anticorpos de um receptor potencial de um grupo diferente.

A coisa mais surpreendente sobre as reações antígeno-anticorpo na correspondência sanguínea é que nenhuma exposição prévia ao antígeno é necessária para que os anticorpos existam. Isso é conhecido como anticorpos naturais.

Anticorpos naturais

Geralmente, para que os anticorpos existam no corpo de um indivíduo, é necessário que os glóbulos brancos do indivíduo tenham sido previamente expostos ao antígeno.

Isso significa que no primeiro contato entre o antígeno estranho e o organismo, não há anticorpos, pois estes são gerados posteriormente, após o contato inicial. Portanto, é impossível para o sistema imunológico ter anticorpos contra, por exemplo, um determinado vírus, se não tiver sido exposto a ele no passado.

A única exceção ao acima são os antígenos anti-AB. Nesses casos, a pessoa tem anticorpos contra o antígeno que seus glóbulos vermelhos não possuem, embora nunca tenham entrado em contato com os glóbulos vermelhos de outra pessoa. Isso é conhecido como anticorpos naturais.

Antígenos e anticorpos relacionados ao grupo sanguíneo

Os grupos sanguíneos são determinados no caso do sistema ABO pela presença de antígenos específicos (A ou B) na membrana dos glóbulos vermelhos e, em contraste, anticorpos contra o antígeno ausente na membrana dos eritrócitos.

Assim, uma pessoa com grupo sanguíneo A expressa o antígeno A na superfície de seus glóbulos vermelhos, enquanto há anticorpos anti-B no soro.

Ao contrário, em pacientes do grupo B, o antígeno B é encontrado, enquanto os anticorpos são anti-A.

Agora, os pacientes com sangue AB têm antígenos A e B. Portanto, não há anticorpos, pois isso destruiria os glóbulos vermelhos dessa pessoa.

Ao contrário, ocorre no grupo O, em que a membrana eritrocitária não apresenta nenhum dos dois antígenos (nem A nem B), enquanto no soro há anticorpos anti-A e anti-B.

Incompatibilidade de grupo ABO

Do exposto, a compatibilidade dos grupos sanguíneos ABO pode ser facilmente deduzida, uma vez que conhecer o antígeno da membrana eritrocitária automaticamente conhece os anticorpos no soro. Assim pois:

- O sangue A é compatível com o grupo A e o grupo O.

- O grupo sanguíneo B é compatível com o sangue B e O.

- Pessoas do grupo O só podem receber sangue O (pois possuem anticorpos anti-A e anti-B), embora seu sangue seja recebido por todos os outros grupos sem problemas, pois não possui antígenos.

- Finalmente. aqueles que têm o grupo sanguíneo AB podem receber sangue de todos os outros grupos (A, B, O e claro AB), uma vez que eles não possuem anticorpos contra nenhum dos antígenos. No entanto, apenas as pessoas do grupo AB podem receber sangue AB, pois todos os outros grupos têm anticorpos que destruiriam esses glóbulos vermelhos.

Antígenos menores

Tal como acontece com os grupos ABO, uma série de proteínas pode ser encontrada na superfície dos eritrócitos que funcionam como antígenos da mesma forma que os antígenos do grupo ABO.

No entanto, esses antígenos não estão presentes em todos os indivíduos. Sua combinação é heterogênea e a penetrância (nível de expressão da proteína) é variável, portanto, uma classificação em grupos como o que existe para ABO e Rh é impossível. É daí que deriva seu nome de "antígenos menores", também conhecidos como "antígenos de baixa incidência".

Embora não sejam frequentes, podem existir anticorpos naturais contra antígenos menores. Entre eles, os mais comuns são Lewis, MNSs, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb e Kidd. Todos eles responsáveis por reações hemolíticas e pós-transfusionais muito graves.

Além disso, pode haver o caso de sensibilização contra antígenos menores por contato prévio, seja com as referidas proteínas antigênicas devido a transfusões anteriores ou devido a imunidade cruzada.

Imunidade cruzada

Diz-se que existe imunidade cruzada quando dois antígenos de duas fontes diferentes (por exemplo, um glóbulo vermelho e uma bactéria) são muito semelhantes, a ponto de os anticorpos contra uma dessas proteínas antigênicas também reagirem com a outra por serem quase idênticos.

Para entender isso melhor, pegue o exemplo hipotético anterior (antígenos de um glóbulo vermelho e de uma bactéria). Em nenhum dos casos existem anticorpos naturais, mas se uma pessoa for exposta à bactéria, eles irão gerar anticorpos contra ela.

Esses anticorpos reagirão mais tarde contra um glóbulo vermelho se seus antígenos forem muito semelhantes aos da bactéria que induziu a formação dos anticorpos.

Se isso acontecer, os glóbulos vermelhos com aquela proteína antigênica específica não podem ser administrados à pessoa que tem os anticorpos, pois haveria rejeição. Aqui reside a importância das reações cruzadas.

Para que serve a prova cruzada?

Como é impossível agrupar o sangue de diferentes indivíduos com base nos antígenos menores, a única maneira de saber se existem anticorpos contra os antígenos menores das hemácias de outra pessoa no sangue de uma pessoa é por meio de prova cruzada..

Nos casos em que os anticorpos estão presentes, ocorre uma reação de hemólise ou aglutinação, razão pela qual se conclui que a reação foi positiva; ou seja, existem anticorpos contra antígenos menores (embora não se saiba exatamente qual). Caso contrário, o teste é negativo.

Base

As correspondências cruzadas são baseadas na reação antígeno-anticorpo. Portanto, com eles é possível detectar se no soro de um receptor existem anticorpos contra os antígenos das hemácias do doador (ou vice-versa), induzindo uma reação antígeno-anticorpo.

Se não houver anticorpos, nenhuma reação ocorre e o teste é considerado negativo. Pelo contrário, se a reação for positiva (há hemólise ou aglutinação durante o teste) pode-se concluir que os anticorpos estão presentes.

Nesse sentido, é importante observar que podem existir anticorpos contra as hemácias tanto no soro do doador quanto no do receptor. É por isso que existem dois tipos de reações cruzadas.

Tipos de reações cruzadas

Anticorpos contra eritrócitos de doadores podem existir no soro do paciente; mas o oposto também pode ocorrer, ou seja, anticorpos no soro do doador contra os glóbulos vermelhos do paciente.

É por isso que existem dois tipos de crossmatch:

- Jogo cruzado principal.

- Crossmatch menor.

Ambos os tipos são realizados rotineiramente no banco de sangue antes da transfusão de hemoderivados, pois se algum dos exames der positivo, há alto risco de reações transfusionais que podem colocar em risco a vida do paciente.

Crossmatch principal

Este teste avalia se o soro do receptor contém anticorpos contra os glóbulos vermelhos do doador.

Se isso acontecer, os hemoderivados não poderão ser administrados, pois uma grande quantidade de anticorpos presentes no plasma do paciente destruirá os glóbulos vermelhos do doador muito rapidamente, gerando reações catastróficas no corpo do receptor no processo. Estas reações são tão graves que podem ser fatais.

Crossmatch menor

Nesse caso, é determinado se há anticorpos contra as hemácias do receptor no soro do doador.

Nesse caso, os anticorpos começarão a destruir os eritrócitos do receptor. Porém, como a quantidade de anticorpos é limitada, a reação é menos intensa; embora ainda seja perigoso.

Fases

Tanto o crossmatch principal quanto o secundário são divididos em três fases:

- Salina.

- Térmica ou incubação.

- Coombs.

Na primeira fase, os glóbulos vermelhos e o soro são misturados em solução salina. Em seguida, adiciona-se albumina e a amostra é incubada a 37ºC por 30 minutos para finalmente prosseguir com a fase de coombs.

Técnica

A técnica de teste cruzado é relativamente simples, pois envolve a adição de glóbulos vermelhos do doador ao soro do paciente (teste cruzado principal), bem como eritrócitos do receptor ao soro do doador (teste cruzado menor).

Para induzir a reação antígeno-anticorpo em um tempo relativamente curto, uma série de etapas padronizadas deve ser seguida. Essas etapas são resumidas de forma simplificada a seguir.

É importante observar que a próxima seção descreve o teste de compatibilidade principal, embora as etapas sejam as mesmas para o teste de compatibilidade menor, mas trocando a origem dos glóbulos vermelhos e do soro.

Fase salina

- Adicione a um tubo de ensaio 2 gotas de soro do receptor (do doador se for a prova cruzada menor).

- Retire uma amostra de glóbulos vermelhos do dador (do receptor, se for a prova cruzada menor).

- Lave e centrifugue os glóbulos vermelhos.

- Ressuspender em uma solução entre 3% e 5%.

- Coloque uma gota desta solução no tubo contendo o soro do receptor.

- Misture delicadamente.

- Centrífuga.

- Leia o resultado na lâmpada de exibição.

Fase térmica

- Adicione 2 gotas de albumina a 22% ao tubo onde foi concluída a fase salina.

- Incubar a 37ºC por 30 minutos.

- Centrifugue por 15 segundos.

- Leia o resultado na lâmpada de exibição.

Fase de Coombs

- Retire as células do tubo e lave-as com solução salina.

- Elimine o sobrenadante.

- Adicione duas gotas do reagente de Coombs.