AGAR DE ESCULINA BILIAR: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2024

O ágar esculina biliar é um meio de cultura sólido seletivo e diferencial. É usado como um teste diagnóstico para determinar a capacidade de um determinado microrganismo de crescer em um meio contendo bile e também de quebrar o glicosídeo esculina em esculetina e glicose.

Este teste diagnóstico é utilizado para diferenciar espécies do gênero Streptococcus pertencentes ao grupo D (bile esculina positiva), de outros grupos de Streptococcus que reagem negativamente a este teste.

Placa de ágar de esculina biliar semeada com uma cepa de Enterococcus (teste positivo). Fonte: Nenhum autor legível por máquina fornecido. Philippinjl assumido (com base em reivindicações de direitos autorais).

Ressalta-se que alguns Streptococcus do grupo viridans podem hidrolisar esculina, mas não são capazes de crescer na presença de bile na concentração de 40%, portanto, neste meio a reação para este grupo é negativa.

Por outro lado, o meio de esculina biliar também é útil para o diagnóstico de espécies de Listeria monocytogenes ou Aerococcus sp, uma vez que esses microrganismos são biliares esculínicos positivos.

O Ágar Esculin Bile é composto por peptona, extrato de carne, bile de boi, esculina, citrato de ferro, ágar e água destilada. Algumas casas comerciais incluem azida de sódio na composição do meio.

O meio pode ser preparado em laboratório se você tiver todos os compostos separadamente ou pode ser preparado a partir do meio desidratado comercial.

Base

O meio de esculina biliar contém peptonas e extrato de carne, ambos os compostos fornecem os nutrientes necessários para o crescimento de microrganismos.

Ele também contém esculina; Esse composto é um glicosídeo formado pela união de um monossacarídeo simples (glicose) com um composto denominado 6,7-diidroxicumarina ou esculetina (aglucona), ligado por uma ligação acetal ou glucosídica.

O teste é baseado em mostrar se a bactéria é capaz de hidrolisar esculina. Se isso ocorrer, a esculina se decompõe em esculetina e glicose. A Esculetina reage com o ferro presente no meio, formando um composto marrom escuro, quase preto.

Isso significa que o citrato férrico atua como um revelador de reação. Esta característica torna o Bile Esculin Agar um meio diferencial.

Por sua vez, a bile é um inibidor que impede o crescimento de alguns microrganismos, portanto, a bactéria, antes de se dividir na esculina, deve ser capaz de crescer na presença da bile. Portanto, este meio é considerado seletivo.

As bactérias que podem se desenvolver neste ambiente são principalmente aquelas que vivem no ambiente intestinal.

Nesse sentido, algumas empresas comerciais adicionam azida sódica ao meio para inibir ainda mais o crescimento de bacilos Gram negativos entéricos, aumentando a seletividade do meio para o crescimento de Streptococcus.

Finalmente, o ágar dá consistência sólida ao meio e a água é o solvente dos compostos.

Preparação

Preparação caseira de ágar esculina biliar

Pesar:

5 g peptonas

3 g de extrato de carne

40 g de bile de boi

1 g de esculina

0,5 g de citrato de ferro

15 g de ágar

1000 ml de água destilada

No caso de adição de azida de sódio, 0,25 g / litro é pesado e adicionado à mistura.

Dissolva os componentes no litro de água destilada, aqueça até que os compostos estejam completamente dissolvidos. Distribua 5 ml em tubos de ensaio com tampa de rosca de 16 x 125 mm. Autoclave a 121 ° C, 15 libras de pressão por 15 minutos.

Retire da autoclave e incline os tubos sobre um suporte, para que o ágar se solidifique em bico largo.

Guarde na geladeira até o uso. Deixe atingir a temperatura ambiente antes de semear.

As placas de ágar esculina biliar também podem ser preparadas; neste caso, toda a mistura é autoclavada em um frasco e posteriormente distribuída em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar e guarde na geladeira.

O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2.

Preparação de ágar esculina biliar a partir de um meio comercial

Pese a quantidade especificada pelo encarte. Isso pode variar de uma empresa para outra. Em seguida, proceda da mesma forma que o procedimento explicado acima.

O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2. A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar escuro.

Meio comercial de esculina biliar. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Formulários

O meio de esculina biliar é usado principalmente para diferenciar estreptococos do Grupo D (bile esculina positivo), do resto dos grupos de Streptococcus (bile esculina negativo).

A combinação do teste de crescimento em caldo hipersal com o teste de esculina biliar pode identificar um grupo especial de Streptococcus do Grupo D denominado Enterococcus.

Este grupo especial de Streptococcus pertence ao grupo D do gênero supracitado e são capazes de hidrolisar esculina na presença de bile, assim como o restante dos membros do grupo D, mas também são capazes de se desenvolver em meio hipersal (BHI com cloreto de 6,5% de sódio), propriedade que faz a diferença.

Portanto, os estreptococos que hidrolisam a bile da esculina, mas não crescem em caldo hipersal, são chamados de estreptococos do grupo D não enterococos.

Semeado

Inocular o meio de preferência com um caldo Todd-Hewitt puro de 24 horas.

Adicione 2 gotas na superfície do meio com uma pipeta Pasteur e espalhe no meio com um loop de platina.

Incubar a 35 ° C por 48 horas, enquanto o tempo de incubação é cumprido, ele pode ser monitorado para ver se há uma reação positiva. Se ao final do tempo a reação permanecer negativa, pode-se incubar por até 72 horas.

Interpretação

Reacção positiva: aparecimento de uma cor castanha escura, quase preta no bico da flauta (no caso do teste em tubo) ou escurecimento do ágar em torno das colónias (no caso do teste em placa).

Reação negativa: não ocorre escurecimento do meio ou há um aspecto preto em menos da metade do tubo após 72 horas de incubação. Por outro lado, o crescimento bacteriano no meio sem o aparecimento da cor preta deve ser considerado um teste negativo.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do meio, uma cepa Enterococcus faecalis ATCC 29212 deve estar disponível como um controle positivo e uma cepa de Streptococcus não pertencente ao grupo D como um controle negativo.

Limitações

-Os meios que não contêm azida sódica permitem o crescimento de bacilos Gram negativos entéricos. Alguns deles podem escurecer o meio.

- Algumas casas comerciais adicionam baixa concentração de bile (10%) e por isso alguns Streptococcus que não pertencem ao grupo D podem se desenvolver no meio e hidrolisar esculina, o que pode gerar erros de interpretação.

Referências

1. Koneman E, Allen S, Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para identificação de bactérias de importância clínica. 3ª ed. Editorial Panamericana. Bons ares. Argentina.
4. Lab. Britannia. Esculina bile com ágar azida. 2015. Disponível em: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipédia, a enciclopédia livre. 22 de agosto de 2017, 17:30 UTC. 22 de abril de 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Disponível em: bd.com
7. Neogen Laboratories. Agar de esculina biliar. Disponível em: foodsafety.neogen.com