AGAR DE FARINHA DE MILHO: CONTEXTO, PREPARAÇÃO E USO - BIOLOGIA - 2025

O ágar fubá de milho é um meio de cultura sólido, de baixo poder nutricional, útil para a subcultura de certos fungos e para a demonstração dos clamidósporos em cepas do complexo Candida albicans. Em inglês é conhecido como Corn Meal Agar.

O meio convencional de fubá tem uma composição muito simples, contém fubá, ágar-ágar e água. Devido ao seu baixo nível nutricional, é ideal para uso na manutenção de cepas de fungos por períodos moderados de tempo, especialmente fungos pretos.

A. Representação gráfica do complexo Candida albicans em ágar farinha de milho. B. Clamidósporos do complexo Candida albicans vistos ao microscópio, formados em ágar de fubá. Fonte: A. GrahamColm / B. Por: CDC / Dr. William Kaplan, Cortesia: Public Health Image Library.

A esporulação do complexo Candida albicans é favorecida neste meio, se 1% de Tween 80 for adicionado durante a preparação do ágar. A formação de clamidosporos é característica dessa espécie e praticamente a única que afeta o homem.

Existem outras espécies que formam clamidosporos, mas é improvável que afetem os humanos, como Candida australis, presente nos excrementos de pinguins, ou C. clausenii, que é uma saprófita raramente encontrada. Da mesma forma, excepcionalmente as espécies C. stellatoidea e C. tropicalis poderiam formá-los.

Por outro lado, a adição de glicose ao meio de fubá favorece a formação de pigmentos nas cepas de Trichophytom rubrum.

É importante ressaltar que existem fungos que não formam hifas ou pseudo-hifas no ágar fubá, como o Cryptococcus neoformans, diferindo de outros gêneros.

O ágar de fubá pode ser feito em casa, no laboratório, ou também podem ser usados ​​meios comerciais.

Base

A farinha de milho é o substrato, o ágar é o agente de solidificação e a água é o solvente.

O ágar de farinha de milho pode ser suplementado com tween 80 (monooleato de sorbitano ou poliéster polissorbato 80). Este composto reduz a tensão superficial do meio devido ao seu poder emulsificante.

Também cria um ambiente hostil que inibe a multiplicação celular exagerada e estimula o crescimento de hifas, favorecendo também a produção de clamidosporos; o último considerado estruturas de resistência. Essa estrutura auxilia na identificação das espécies de Candida albicans.

Por sua vez, a glicose neste meio aumenta a capacidade de formação de pigmentos de alguns fungos.

Deve-se notar que o meio de fubá com glicose não é útil para a demonstração de clamidósporos no complexo de Candida albicans.

Preparação

Preparação de ágar de fubá caseiro

Pesar 47 g de farinha de milho amarela e dissolver em 500 ml de água destilada. Aquecer a 60 ºC, mexendo sempre a preparação por um período de aproximadamente 1 hora. Em seguida, filtre com um pedaço de gaze e algodão, opcionalmente pode ser filtrado novamente passando a preparação por um papel de filtro Whatman nº 2.

Completar o volume para 1000 ml com água destilada. Adicione 17 g de ágar-ágar, aqueça até dissolver. Autoclave por 15 minutos a 121 ºC.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. Guarde na geladeira.

A cor do meio preparado é esbranquiçada com aspecto granuloso.

Se quiser preparar farinha de milho com glicose ao preparo descrito acima, adicione 10 g de glicose.

Agar comercial de farinha de milho

Pesar 17 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura pode ser aquecida, agitando suavemente para se dissolver completamente. Esterilize em autoclave a 121 ºC, a 15 lb, por 15 minutos.

Despeje em placas de Petri estéreis. Vamos solidificar. Inverta e guarde na geladeira até o uso. Temperar antes de usar.

O pH deve ser 6,0 ± 0,2 a 25 ºC.

Agar de farinha de milho com Tween 80

Para cumprir a ISO 18416, o ágar de fubá deve ser preparado da seguinte forma:

Pesar 65 gramas por litro e adicionar 10 ml de Tween 80. Aquecer e ferver por alguns minutos até dissolver, tomando cuidado para não superaquecer. Esterilize a 121 ºC por 15 minutos.

Agar de farinha de milho com glicose

Para melhorar o poder cromogênico das colônias de Trichophyton rubrum e diferenciá-las de T. mentagrophytes, glicose a 0,2% pode ser adicionada à fórmula original. Você não precisa ter Tween 80, pois a glicose inibe a formação de clamidósporos.

Usar

Principalmente, o uso do ágar farinha de milho destina-se ao estudo de cepas de Candida, auxiliando na sua identificação por meio da observação característica de clamidósporos nas espécies albicans. Ou seja, o uso desse ágar serve como método auxiliar na identificação dessas leveduras.

Ambas as espécies saprofíticas e patogênicas podem se desenvolver neste ágar, mas cada uma forma estruturas miceliais características. Por exemplo, espécies do gênero Torulopsis não produzem micélio e se reproduzem apenas por blastoconídios.

Da mesma forma, as espécies Trichosporon e Geotrichum produzem artroconídios em ágar de fubá e às vezes é difícil distinguir entre um e outro.

Os artroconídios do gênero Geotrichum produzem uma extensão das hifas que lembra um taco de hóquei.

Além disso, a produção de pigmentos com ágar de farinha de milho suplementado com glicose é útil na identificação de Trichophytom rubrum.

Semeado

Colônias suspeitas de Candida obtidas em meio de cultura primário - ágar Sabouraud - de amostras clínicas, cosméticos, solos, entre outros, são subcultivadas em ágar farinha de milho. O meio é semeado e incubado a 22 ° C durante 24 a 48 horas. O tempo de incubação pode ser aumentado, se necessário.

Demonstração de clamidosporo

Para tanto, o ágar farinha de milho com Tween 80 deve ser inoculado pela técnica de Dalmau. Esse método consiste em pegar uma porção da colônia suspeita com o cabo de platina e fazer três cortes paralelos no meio, mantendo o cabo a 45º. Os cortes devem ser separados por uma distância de 1 cm um do outro.

Posteriormente, um objeto de cobertura previamente inflamado é colocado sobre as estrias semeadas, de forma que a metade fique coberta e a outra descoberta.

Incubar as placas semeadas a 30 ° C por 48-72 he, em seguida, examinar ao microscópio através da lamínula.

Manutenção de cepas de fungos

Para a manutenção das cepas, as placas semeadas e cultivadas são mantidas em geladeira (4 a 8 ºC). Desta forma, podem durar várias semanas e ser usados ​​para fins de ensino ou pesquisa.

Controle de qualidade

Para o controle da esterilidade, uma placa é incubada sem inoculação em temperatura ambiente, espera-se que não haja crescimento ou alteração de cor.

Para controle de qualidade, cepas conhecidas podem ser semeadas, tais como: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Os resultados esperados são inibição parcial para S. aureus e E. coli. Enquanto um crescimento satisfatório é esperado no resto das cepas.

Aspergillus niger cresce com colônias pretas e esporuladas em um tempo aproximado de 5 dias de incubação.

Colônias de leveduras Candida albicans com produção de clamidosporos.

Saccharomyces cerevisiae produz grandes células de levedura.

Limitações

No fundo da placa forma-se um precipitado amarelo que não deve ser confundido com colônias.

Referências

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