AGAR MACCONKEY: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O ágar MacConkey é um meio sólido que permite o isolamento exclusivo de bactérias Gram negativas. Por isso, é um meio seletivo e também permite distinguir entre bacilos fermentadores de lactose e não fermentadores, o que o torna um meio diferencial. É um dos meios de cultura mais amplamente usados ​​em um laboratório de microbiologia.

Este meio é utilizado principalmente para o isolamento de bacilos Gram negativos pertencentes à família Enterobacteriaceae, incluindo espécies oportunistas e enteropatogênicas.

Ágar MacConkey semeado com dois tipos de bactérias. Colônias fermentadoras de lactose do lado esquerdo, colônias não fermentadoras de lactose do lado direito.

Também pode ser usado para isolar outros bacilos entéricos que vivem no trato gastrointestinal, mas não pertencem a Enterobacteriaceae, como Aeromonas sp, Plesiomonas sp, entre outros.

Finalmente, pode isolar outros bacilos Gram-negativos não fermentadores de glicose que são encontrados no meio ambiente, água ou solo, mas que às vezes podem ser patógenos oportunistas, como Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, entre outros.

Base

Ágar MacConkey

O fundamento desse meio pode ser explicado por meio da descrição de seus componentes, uma vez que cada um tem uma finalidade que determina uma propriedade dele.

Sais biliares e violeta cristal

Nesse sentido, o ágar MacConkey possui uma composição complexa. Em primeiro lugar, contém sais biliares e violeta cristal.

Esses elementos são responsáveis ​​por inibir o crescimento de bactérias Gram positivas e de alguns bacilos Gram negativos fastidiosos. Por sua vez, favorece o desenvolvimento de bacilos Gram negativos que não são afetados por essas substâncias. Portanto, é um meio seletivo.

Diz-se que é ligeiramente seletivo em comparação com outros meios que também inibem o crescimento de bactérias Gram positivas e também da maioria das bactérias Gram negativas.

Peptonas, polipectonas e lactose

Contém substâncias que fornecem os nutrientes necessários aos microrganismos que se desenvolvem neste ambiente, como peptonas, polipectonas e lactose.

A lactose é o ponto chave para que o meio seja um meio diferencial, uma vez que os microrganismos que têm a capacidade de fermentar a lactose desenvolverão colônias rosa fortes.

Algumas bactérias podem fermentar a lactose lenta ou fracamente, desenvolvendo colônias rosa claro e permanecerem positivas para a lactose.

Os que não fermentam a lactose utilizam as peptonas como fonte de energia, produzindo amônia, alcalinizando o meio. Por isso, as colônias que se originam são incolores ou transparentes.

Indicador de pH

A mudança de cor é obtida por meio de outro composto essencial do ágar MacConkey. Este composto é o indicador de pH, que neste caso é vermelho neutro.

A fermentação da lactose gera a produção de ácidos mistos. Eles acidificam o meio a um pH abaixo de 6,8.

Isso faz com que o indicador de pH mude para um tom rosa profundo. A intensidade da cor pode variar dependendo do pH final.

Água destilada, cloreto de sódio e ágar

Por outro lado, contém água destilada e cloreto de sódio que conferem ao meio a hidratação e equilíbrio osmótico. Por fim, o meio contém ágar, que é a base que dá a consistência de meio sólido.

O meio de ágar MacConkey preparado deve ter um pH final ajustado para 7,1 ± 0,2.

Preparação

Para um litro de ágar MacConkey, 50 g do meio desidratado devem ser pesados, colocados em um frasco e dissolvidos em um litro de água destilada. Após 10 minutos de repouso é aquecido, mexendo constantemente até à fervura durante 1 minuto.

O frasco é então colocado na autoclave e esterilizado a 121 ° C por 20 minutos. Ao final do tempo, é retirado da autoclave e deixado esfriar até atingir a temperatura de 45 ° C, para posteriormente servir em placas de Petri estéreis dentro de uma capela de fluxo laminar ou em frente ao bico de Bunsen.

Deixe solidificar e guarde em um porta-placas invertido e leve à geladeira de 2-8 ° C até o uso.

Para obter um ágar MacConkey que inibe o efeito de enxameação produzido pelo gênero Proteus, é usado um ágar MacConkey com baixo teor de sal.

Usos do ágar MacConkey convencional

O Ágar MacConkey está incluído em todos os conjuntos de meios de cultura preparados para a semeadura de amostras clínicas recebidas no laboratório. Também é útil em microbiologia de alimentos e microbiologia ambiental.

A variedade de bastonetes Gram negativos que crescem neste meio expressa características fenotípicas que ajudam a fazer um diagnóstico presuntivo da espécie em questão. Por exemplo, o tamanho, cor, consistência e cheiro das colônias, são algumas das características que podemos orientar.

Nesse meio, as espécies Escherichia coli, Klebsiella sp e Enterobacter sp produzem colônias rosa fortes, circundadas por uma zona de bile precipitada.

Já bactérias como Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp e Hafnia sp podem aparecer incolores após 24 horas ou rosa claro em 24-48 horas.

Da mesma forma, os gêneros Proteus, Edwadsiella, Salmonella e Shigella produzem colônias incolores ou transparentes.

Outras variantes de ágar MacConkey

Existem outras variantes do Agar MacConkey com finalidades específicas. Eles são mencionados abaixo:

Ágar MacConkey com sorbitol

Este meio foi projetado para distinguir a cepa enteropatogênica (Escherichia coli enterohemorrágica O157: H7) do resto das cepas de Escherichia coli.

Este meio troca o carboidrato lactose por sorbitol. As cepas enterohemorrágicas de E. coli O157: H7 diferem das demais porque não fermentam o sorbitol e, portanto, colônias transparentes são obtidas, enquanto o restante das cepas de E. coli fermenta o sorbitol e as colônias são rosa forte.

Ágar MacConkey sem cristal violeta, nem sal

Este ágar difere muito do ágar MacConkey clássico, uma vez que não possui um cristal violeta e bactérias Gram positivas podem crescer.

Por outro lado, a ausência de sal inibe o aparecimento de enxameamentos no ágar produzido por alguns bacilos entéricos, como os do gênero Proteus, facilitando o isolamento de todas as bactérias presentes, inclusive as Gram positivas.

Ágar MacConkey com cefoperazona

Esta variante do ágar MacConkey foi projetada para isolar inicialmente Laribacter hongkongensis e mais tarde foi considerada útil para o isolamento de Arcobacter butzleri. Ambos são bastonetes Gram negativos ligeiramente curvos resistentes à cefoperazona.

Essas bactérias foram recentemente associadas a causar gastroenterite e diarreia adquirida em indivíduos asiáticos e europeus, emergindo como dois poderosos patógenos emergentes.

O antibiótico permite inibir a flora acompanhante do trato gastrointestinal, o que favorece o desenvolvimento dessas bactérias, evitando que passem despercebidas, já que requerem 72 horas para crescer.

Agar MacConkey preparado com água do mar a 10% v / v

Esta variante é útil para a avaliação de indicadores sanitários bacterianos de contaminação fecal, incluindo coliformes totais e coliformes fecais em águas salgadas recreativas (praias e baías).

Cortez et al em 2013 demonstraram que o meio preparado dessa forma aumenta significativamente a recuperação desses microrganismos no meio salino, em comparação ao uso do ágar MacConkey preparado com água destilada.

Isso se deve ao fato do meio modificado estimular o crescimento de bactérias que estão fisiologicamente em estado de latência "viável, mas não cultivável", portanto não são recuperáveis ​​em meio convencional.

Referências

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Uso de ágar cefoperazona MacConkey para isolamento seletivo de Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
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