- Base
- Interpretação
- -Teste coagulase
- materiais
- Técnica
- Interpretação
- - Teste de coagulase com fibrinogênio
- Usar
- Controle de qualidade
- Limitações
- Referências
O teste da coagulase é uma técnica laboratorial usada para revelar a presença da enzima coagulase. Essa enzima tem a propriedade de coagular o plasma. Loeb em 1903 foi o primeiro a descrever esta enzima.
Esse teste é realizado em cocos Gram-positivos e catalase-positivos, permitindo distinguir as cepas de Staphylococcus aureus do restante dos estafilococos, por ser o único microrganismo de importância clínica que o produz.
Ambas as imagens revelam um Teste de Coagulase positivo. Fonte: imagem à esquerda: Philippinjl. Imagem à direita: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.
Nesse sentido, os membros da Família Staphylococaceae com teste negativo são frequentemente referidos como Staphylococcus coagulase negativo.
Existem algumas cepas além de S. aureus que podem produzir coagulase, como Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius e S. delphini.
No entanto, os três primeiros são de importância clínica em nível veterinário e muito raramente podem ser encontrados como um agente causal de infecções em humanos, enquanto S. delphini só é encontrado em ambientes marinhos.
Além disso, eles são facilmente diferenciados porque S. hyicus e S. intermedius não fermentam manitol e S. schleiferi spp coagulans não fermenta maltose ou trealose, enquanto S. aureus fermenta esses carboidratos.
A presença da enzima coagulase foi associada à virulência das cepas. No entanto, essa teoria tem sido desmoronando, à medida que outras espécies virulentas coagulase-negativas capazes de produzir infecções significativas são observadas.
Base
Interpretação
Aglutinação em 5-20 segundos (teste fortemente positivo).
Aglutinação variável ocorrendo entre 20 segundos e um minuto (teste positivo retardado).
Algum grau de aglutinação após um minuto (evidência duvidosa). Recomenda-se repetir o teste ou confirmar pelo método do tubo.
Não há aglutinação (teste negativo).
Resultado com SSF. Deve sempre dar negativo; se der positivo automaticamente, o resultado do teste é invalidado.
-Teste coagulase
materiais
- Tubo de ensaio estéril
-Plasma
- Banho de Maria a 37 ° C.
Técnica
Pipete 0,5 ml de plasma em um tubo de ensaio 12 x 75 com uma pipeta estéril. Carregue a alça de platina com 2 a 4 colônias puras para estudar a partir de uma cultura sólida por 18 a 24 horas e dissolver no plasma cuidadosamente misture e incube a 37 ° C por 4 horas.
Examine o tubo na primeira hora sem sacudi-lo, apenas incline-o suavemente. Se um coágulo ainda não for visto, ele pode continuar a ser observado a cada 30 minutos até que as 4 horas sejam completadas. Se após 4 horas continuar negativo, pode ser deixado por até 24 horas, mas em temperatura ambiente. Observe e relate o resultado.
Com base na experiência, alguns microbiologistas recomendam o uso de 500 µl de uma suspensão bacteriana de uma cultura de 18 horas em meio líquido para realizar o teste.
Parece oferecer resultados mais rápidos e confiáveis do que ao emulsificar colônias de meio sólido, especialmente se o plasma humano obtido do banco de sangue foi usado.
O uso de cepas de um caldo ajuda a diluir a possível presença de anticorpos anti-estafilocócicos humanos no plasma que podem inibir a ação da coagulase.
Interpretação
Se for observado um coágulo que abrange todo o líquido (coágulo completo) ou um coágulo que não está no líquido restante (coágulo parcial), deve ser considerado um teste positivo.
Se nenhum coágulo for formado, ou seja, a suspensão permanecer homogênea, o teste é negativo.
- Teste de coagulase com fibrinogênio
O fibrinogênio é usado da mesma forma que o plasma e é usado para os testes de lâmina e tubo. Proceda conforme descrito para o plasma e interprete da mesma maneira.
Usar
É usado para diferenciar o Staphylococcus aureus dos estafilococos coagulase negativos.
Controle de qualidade
Tenha culturas frescas de uma cepa de S. aureus disponíveis para serem usadas como controle positivo. Uma cepa de S. epidermidis também está disponível como controle negativo.
Limitações
-Um teste positivo não deve ser deixado em incubação por 24 horas, pois S. aureus produz uma fibrinolisina que dissolve o coágulo.
-Para um teste confiável, deve-se usar plasma fresco ou recém-reconstituído, assim como é importante usar culturas bacterianas frescas (18 a 24 h). Isso evita falsos negativos.
-O teste deve ser realizado em conjunto com um controle negativo e um controle positivo.
-Alguns meios sólidos podem interferir no teste de coagulase. Não é recomendado o uso de colônias de ágar manitol salgado.
-Se for usado plasma citratado, recomenda-se colocar 5 unidades de heparina por ml de plasma para evitar falsos positivos. Isso ocorre porque alguns microrganismos diferentes de S. aureus podem quebrar o citrato e causar a coagulação do plasma. Neste caso, é aconselhável fazer um teste de Gram e um teste de catalase.
-É importante, no tubo de ensaio, monitorar a reação a cada 30 minutos, pois existem cepas de S. aureus que produzem altas concentrações de fibrinolisina e vão diluir rapidamente o coágulo neoformado. Evite falsos negativos.
-Ao monitorar o teste, evite sacudir o tubo bruscamente, pois isso pode destruir o início da formação do coágulo que não será restaurado posteriormente, causando falsos negativos.
Referências
- Koneman E, Allen S, Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para identificação de bactérias de importância clínica. 3ª ed. Editorial Panamericana. Bons ares. Argentina.
- Laboratórios Pró-Lab. O coelho coagula o plasma. Disponível em: prolab.com
- "Coagulase." Wikipédia, a enciclopédia livre. 12 de fevereiro de 2019, 04:23 UTC. 22 de abril de 2019, 15:50 wikipedia.org.