VERMELHO CONGO: CARACTERÍSTICAS, PREPARAÇÃO E APLICAÇÕES - BIOLOGIA - 2025

O vermelho do Congo é um corante azo para proteínas formado pelo acoplamento de um sal de diazônio e um anel aromático ativo. Essa substância é capaz de absorver radiação eletromagnética no espectro visível, por isso possui uma cor intensa.

Ele é carregado negativamente. Portanto, tem afinidade por componentes celulares carregados positivamente, como certas substâncias proteicas. Sua cor varia de acordo com o pH. Nesse sentido, se o meio for ácido (<que pH3), a cor é azul intenso. Entre pH3 - pH 5,2 é fúcsia (zona de viragem), e com> pH 5,2 a cor é vermelha escura.

Solução coloidal desidratada de Vermelho Congo e Vermelho Congo. Fonte: Pixinio.com e Wikipedia.com

É uma substância muito versátil, pois tem múltiplos usos. Tem sido utilizado como corante na indústria têxtil e também em células e tecidos.

Também fazer meios de cultura que medem a ação enzimática, como indicador de pH, como substância de controle na avaliação do bom funcionamento dos espectrofotômetros, no estudo da formação de biofilme, ou no diagnóstico de amiloides.

Da mesma forma, tornou possível distinguir sorotipos bacterianos e fúngicos por meio da identificação de estruturas específicas em suas paredes (lipopolissacarídeos).

Características do vermelho do Congo

Esta substância foi descoberta por Böttiger em 1884. É um derivado do diazônio formado pelo ácido bis-diazóico da benzidina com ácido naftiônico. A molécula de vermelho do Congo mede 21 Armstrong e o peso molecular é de aproximadamente 8.000 g / mol.

O vermelho do Congo caracteriza-se por ser solúvel em água e ainda mais em solventes orgânicos como o etanol, formando uma solução coloidal.

Tem afinidade pela celulose, pelo tecido amilóide e por componentes celulares carregados positivamente.

Preparação

O Congo Red é preparado em diferentes concentrações dependendo da técnica a ser utilizada. A maioria usa vermelho Congo a 1%, 2%, 0,1%, entre outros.

Por exemplo, para preparar vermelho Congo a 2%, devem ser pesados ​​2 g de corante alimentar desidratado e adicionados 100 ml de água destilada. Em seguida, é mantido em uma garrafa âmbar.

Formulários

Como corante na indústria têxtil

Durante algum tempo foi muito utilizado na indústria têxtil devido à sua fixação no algodão, mas atualmente está em desuso por ser cancerígeno e também porque a cor não é estável, descolorindo pela fricção.

Determinação da capacidade de formação de biofilme

A capacidade de formação de biofilme dos microrganismos tem se mostrado um fator de virulência.

Nesse sentido, o corante vermelho do Congo é utilizado como método para determinar a formação de biofilme. O vermelho do Congo liga-se aos exopolissacarídeos presentes no biofilme. No entanto, em comparação com outros métodos, é o menos recomendado devido aos elevados falsos negativos que ocorrem.

O método utiliza ágar vermelho do Congo, este é composto de ágar sangue como base, glicose (10 g / l) e corante vermelho do Congo (0,4 g / l). As cepas a serem avaliadas são semeadas no meio e incubadas por 24 horas a 37 ° C, sendo posteriormente incubadas por 48 horas em temperatura ambiente.

Um teste positivo é evidenciado se forem observadas colônias cristalinas de cor preta e aparência seca.

Controle de qualidade de espectrofotômetros

Para avaliar se um equipamento de medição de absorbância ou transação está de acordo com os parâmetros fotométricos estabelecidos por regulamentações internacionais, uma técnica simples pode ser usada para estabelecer se o equipamento emite resultados dentro das faixas de aceitabilidade.

Uma das técnicas de avaliação é o vermelho do Congo, baseado no ponto isosbéstico.

O ponto isosbéstico é o comprimento de onda no qual o vermelho do Congo emite a mesma absorbância, independentemente do pH, concentração e temperatura. O valor da absorbância é fixo e pode ser usado como referência.

O ponto isosbéstico teórico do vermelho do Congo é conhecido como 541 nm. Caso o valor obtido seja diferente, sabe-se que o equipamento está com problemas de desvio de comprimento de onda, devendo ser verificado por técnico especializado.

Preparação de meios de cultura

Ortiz et al., Descrevem um meio de cultura preparado com corante vermelho Congo e carboximetilcelulose, denominado ágar CMC, para detectar cepas microbianas de celulite; isto é, produtores de celulase (endogluconeses, exoglucanases e ß-glucosidase).

Este meio possui uma coloração intensa. A cor será dissipada pela ação da enzima endoglucanase que quebra a estrutura da carboximetilcelulose. Isso sugere uma reação positiva.

A diminuição da viscosidade e absorbância permite que a atividade enzimática seja quantificada. Por exemplo, em cepas de Streptomyces sp.

Identificação de microorganismos

O vermelho congo apresenta afinidade por estruturas polissacarídicas de certas cepas, possibilitando a identificação desses microrganismos. Entre eles estão Escherichia coli e Shigella flexneri.

As placas de ágar vermelho Congo também são utilizadas para obter colônias características, como é o caso de Azospirillum sp, que dá colônias vermelhas escarlates, entre outras.

Mancha de células e tecidos

Uma das aplicações mais comuns do vermelho do Congo é sua utilidade no diagnóstico de amiloidose. Essa estranha doença consiste no acúmulo extracelular de uma proteína anormal em vários órgãos. Esta proteína anormal é produzida na medula óssea e é chamada de amilóide.

O vermelho do Congo tem uma grande afinidade por esta substância. Esta propriedade tem sido usada para mostrar sua presença em cortes histológicos de tecido. Congo Red é usado em conjunto com Hematoxylin / Eosin para esta finalidade.

A união do tecido amiloide com o vermelho do Congo ocorre por meio de ligações de hidrogênio apolares, entre os grupos carboxila e o grupo amino. A proteína amilóide fornece os grupos carboxila (COOH) e o vermelho do Congo o grupo amino.

O tecido amilóide é colorido em vários tons, variando do rosa ao vermelho profundo, quando visto ao microscópio óptico. Em microscópios com luz duplamente polarizada, essas preparações são observadas com birrefringência verde-maçã patognomônica.

Ou seja, apresentam dicroísmo, pois as fibras amielóides são anisotrópicas. Esta observação confirma o diagnóstico.

A coloração do tecido com vermelho do Congo é compatível com outras metodologias de diagnóstico, como métodos imunocitoquímicos, e pode até ser recolorida.

Como um indicador de pH

A propriedade de se voltar contra as mudanças no pH é usada pela técnica chamada cromoendoscopia.

Esta técnica utiliza corantes e indicadores de pH que permitem a detecção de certas patologias. Entre eles está o uso do vermelho do Congo, que pode revelar focos de câncer precoce na mucosa gástrica, sendo utilizado como marcador de acidez.

A técnica é baseada no fato de que o vermelho do Congo em pH ácido é preto. Portanto, após a colocação da solução de vermelho do Congo na mucosa gástrica, serão escolhidas as áreas onde houver palidez para a retirada da amostra para biópsia, ou seja, onde não houver produção de ácido. Isso sugere a presença de um foco canceroso ou perda de células parietais.

Referências

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