ÓLEO DE IMERSÃO: COMPOSIÇÃO, CARACTERÍSTICAS, USOS - BIOLOGIA - 2024

O óleo de imersão é um líquido viscoso claro com alto índice de refração. Por isso é amplamente utilizado em observações microscópicas, pois proporciona a propriedade de concentrar a luz ao passar pela objetiva de 100X do microscópio, aumentando seu poder de resolução.

Isso ocorre porque um filme viscoso é formado entre a objetiva e o esfregaço, evitando que os raios de luz se espalhem ao atingir o ar, concentrando os feixes de luz em direção à amostra.

Conta-gotas com imersão em óleo e microscópio focado com objetiva 100X por imersão em óleo. Fonte: Pixabay.com

O óleo de imersão é usado apenas com a objetiva 100X. É por isso que a objetiva 100X também é chamada de objetiva de imersão. O resto são conhecidos como alvos secos. Esta lente não pode ser usada sem o óleo de imersão, pois sem ele a visualização não seria satisfatória.

A principal função do óleo de imersão é fornecer imagens mais claras, nítidas e definidas, permitindo a observação de detalhes que com outras lentes não seriam possíveis.

O primeiro óleo utilizado para este fim foi o óleo de erva-doce, utilizado em conjunto com as primeiras lentes de imersão criadas por Giovanni Battista Amici. Isso apenas evitou a aberração cromática, mas não aumentou a abertura numérica do sistema de lentes.

Em seguida, o óleo de cedro foi usado, mas teve muitas desvantagens que forçaram seu desuso. Entre eles estava a alta acidez, que prejudicava as objetivas no curto prazo.

Posteriormente, outras substâncias como água e glicerina foram utilizadas até o surgimento dos óleos sintéticos de imersão, que aos poucos foram sendo refinados até atingirem o atual óleo de imersão, que é um composto complexo de substâncias orgânicas.

Composição do óleo de imersão

O óleo de imersão é formado por uma mistura de compostos orgânicos como: terfenila, terfenila hidrogenada, hidrocarbonetos naturais e polibutenos.

Características do óleo de imersão

O óleo de imersão é um líquido amarelo claro, de aparência levemente viscosa, com odor característico e densidade entre 0,92 a 0,99 g / cm ³.

O óleo de imersão não é solúvel em água e tem um ponto de ebulição de 340 ° C. O índice de refração a (n 20 ° C / D): varia de 1,482 - 1,516. Enquanto isso, o índice de flash é 110 ° C e a viscosidade varia de 100 a 120 mPa.s.

Este produto deve ser descartado de maneira adequada, pois é ecotóxico. Ou seja, é prejudicial ao meio ambiente, afetando principalmente os animais aquáticos. Por outro lado, é irritante para a pele e mucosas. Se ingerido, é nefrotóxico e cardiotóxico.

O óleo de imersão é estável entre 15 e 25 ° C, temperatura na qual deve ser armazenado.

Noções básicas de óleo de imersão

Ao usar lentes de maior ampliação, a intensidade da luz deve ser aumentada. No entanto, muitos dos feixes de luz são perdidos porque se espalham ao atingir o ar (espaço entre a lamela e a lente), e até mesmo alguns raios são totalmente refletidos.

O óleo de imersão tem um índice de refração semelhante ao do vidro. Portanto, quando o óleo entra em contato entre a lente 100X e a lamela, os feixes de luz são concentrados.

Os raios concentrados passam pela amostra e tornam a imagem mais nítida, ou seja, aumentam a abertura numérica da objetiva e corrigem as aberrações cromáticas e esféricas.

Usos ou aplicações

O uso de óleo de imersão é especialmente necessário quando é necessário observar uma imagem de forma mais ampla, utilizando a objetiva de maior aumento (objetiva de 100X) para ver detalhes essenciais para estabelecer um diagnóstico.

Portanto, é amplamente utilizado em estudos microscópicos em diversas áreas como: histologia, citologia, hematologia e bacteriologia. Por exemplo, é útil para estudar as características das células e tecidos de um paciente.

Também é utilizado para a análise de esfregaços de sangue, onde queremos detalhar as características dos hemoparasitas dentro e fora dos eritrócitos, bem como em preparações de Gram, para definir as características morfotintorial dos microrganismos.

É geralmente utilizado em preparações fixas, pois não é recomendado em preparações frescas. Isso ocorre porque a tensão superficial do óleo faz com que a lamela se mova, fazendo com que a amostra se desloque durante a observação e evite a análise.

Por outro lado, o óleo de imersão não é útil apenas em microscopia de luz convencional: ele também é usado em microscópios de fluorescência de reflexão interna total (TIRFM) e em aplicações de fluorescência confocal.

Etapas para observar uma preparação usando óleo de imersão

Para visualizar uma lâmina em um microscópio, a lâmina deve primeiro ser focada com a objetiva de menor ampliação, geralmente 10X, com baixa intensidade de luz.

Em seguida, ele vai para a objetiva de 40X, e o caminho da luz é ligeiramente aumentado. Algumas análises podem ser realizadas com esta ampliação, mas uma ampliação de 100X é necessária para ver os detalhes estruturais.

Antes de passar para a objetiva 100X, uma gota de óleo de imersão é colocada na lamela, bem onde você deseja observar e, em seguida, a torre do microscópio é movida para localizar a objetiva 100x na preparação.

A intensidade da luz é regulada (aumentada) (movendo o condensador e abrindo o diafragma). Então, com alguns pequenos movimentos do parafuso do micrômetro (para frente ou para trás), ele deve focar perfeitamente se o microscópio usar objetivas parafocais.

Se você tentar focar a preparação diretamente com as lentes de imersão, poderá ter problemas para encontrar o foco. Não é uma ação impossível, mas a dificuldade aumenta significativamente.

Cuidado

Para usar o óleo de imersão, certas condições devem ser levadas em consideração.

Quando uma preparação colorida for feita, como um esfregaço corado com Giemsa ou Gram, espere que o esfregaço seque completamente antes de colocar o óleo por imersão. Caso contrário, o óleo junto com a água formarão micelas que não permitirão que o preparo seja visto.

Por outro lado, após a observação do lote de preparações, ou seja, ao final da jornada de trabalho, a objetiva 100X deve ser cuidadosamente limpa, utilizando-se um papel para lentes com álcool etílico. Se a lente ficar suja, o óleo vai secar e será muito difícil removê-la, danificando o campo de visão.

Da mesma forma, deve-se levar em consideração que o óleo é inflamável e deve ser mantido afastado de fontes de calor (isqueiros). É importante evitar aquecê-lo acima de 65 ° C.

Finalmente, o óleo é um produto tóxico. Portanto, o contato direto com a pele e membranas mucosas deve ser evitado, onde pode causar leve irritação. Para evitar acidentes, recomenda-se o uso de luvas e óculos de segurança no manuseio.

Em caso de contato com o óleo, a área deve ser lavada com bastante água. Se o óleo espirrar nos olhos, deve-se lavar da mesma forma, mantendo os olhos abertos. Em caso de ingestão acidental, é importante beber água morna e provocar vômito, além de ir ao médico mais próximo.

Referências

1. "Microscópio de fluorescência de reflexão interna total." Wikipédia, a enciclopédia livre. 30 de dezembro de 2018, 22:46 UTC. 14 de maio de 2019, 01:54
2. IVD. Imersão em óleo microscópico. Disponível em: Usuários / Equipe / Downloads.
3. Biologia e Microbiologia Ambiental. Operação do microscópio óptico. Disponível em: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. História do microscópio e seu impacto na microbiologia. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Disponível em: scielo.
5. Herrero J. Practice No. 1: Fundamentos e uso do microscópio óptico composto comum. Universitat d´Alacant Disponível em: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Óleo de imersão, para microscopia. 2001. Disponível em: insumos-labcentral.