AGAR BHI: BASE, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O ágar BHI ou meio ágar Brain Heart Infusion é uma cultura sólida nutritiva. Em espanhol, nos referimos a ele como ágar de infusão de cérebro e coração. É um meio de cultura não seletivo, o que significa que todos os tipos de bactérias Gram positivas e Gram negativas podem se desenvolver, bem como algumas leveduras e fungos filamentosos.

É composto por uma infusão de cérebro e coração de bezerro, hidrolisado péptico de tecidos animais, hidrolisado pancreático de caseína, cloreto de sódio, glicose, fosfato dissódico e ágar.

Placas BHI. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Deve-se observar que o ágar BHI é um dos meios de cultura mais usados ​​em laboratórios de bacteriologia. Pode ser usado sem suplementos como cultura primária, subcultura de colônias obtidas em outros meios seletivos ou para manutenção de cepas em laboratório.

Por outro lado, é um meio ideal para ser utilizado como base no preparo de meios enriquecidos, como ágar sangue e ágar chocolate. Ambos são ideais para isolar microorganismos exigentes do ponto de vista nutricional. No entanto, deve-se notar que, por conter glicose, não é adequado para observar os padrões de hemólise.

Da mesma forma, o ágar BHI pode ser usado para a preparação de meios especiais para o isolamento de microrganismos patogênicos de difícil crescimento em meios comuns, entre eles: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae e Histoplasma capsulatum.

Com o aditivo antibiótico, o ágar BHI torna-se um meio seletivo para o isolamento de fungos.

Base

É um meio de cultura nutritivo para isolar microorganismos moderadamente exigentes, e seu enriquecimento pode ser aumentado com a adição de sangue e outros suplementos nutricionais.

É um meio de cultura não seletivo, pois permite o crescimento da maioria das bactérias Gram positivas e Gram negativas, bem como de alguns fungos. No entanto, pode ser feito seletivo com a adição de antibióticos.

O meio contém infusão de cérebro e coração de bezerro, hidrolisado péptico de tecidos animais e hidrolisado pancreático de caseína; Todos esses compostos atuam como fontes de vitaminas, aminoácidos, nitrogênio e carbono.

A glicose é um carboidrato que fornece energia aos microorganismos depois de fermentados. Enquanto isso, o cloreto de sódio e o fosfato dissódico mantêm o equilíbrio osmótico e fornecem um pH próximo da neutralidade. Finalmente, o ágar dá ao meio consistência sólida.

Preparação

Pesar 52 gramas do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Leve a mistura a uma fonte de calor até ferver, mexendo sempre durante o processo de dissolução.

As placas ou cunhas de ágar BHI podem ser preparadas sem aditivos.

Cunhas

Para o preparo das cunhas, servir o preparo até encher a metade de cada tubo, cobrir e esterilizar em autoclave a 121 ° C por 15 minutos, ao sair, colocar sobre uma base até solidificar. Posteriormente, guarde na geladeira até o uso.

BHI wedges para bacterioteca. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Pratos

A mistura dissolvida é autoclavada a 121 ° C por 15 minutos, deixando esfriar a 50 ° C e 20 ml do meio são servidos em placas de Petri estéreis. Eles podem solidificar, são invertidos e armazenados na geladeira até o uso. Deixe as placas atingirem a temperatura ambiente antes de semear.

O pH do meio deve permanecer em 7,4 ± 0,2.

O meio bruto é de cor bege e o meio preparado é de cor âmbar claro.

Preparação de ágar sangue

Após esterilizar o meio, resfrie a uma temperatura de aproximadamente 45 a 50 ° C, em seguida, adicione o sangue (50 ml), misture delicadamente para homogeneizar e sirva assepticamente 20 ml em cada placa de Petri. Se houver formação de bolhas na placa, a chama do isqueiro deve ser passada rapidamente sobre as bolhas para eliminá-las.

Da mesma forma, meios especiais podem ser preparados adicionando os aditivos correspondentes quando a mistura atingir uma temperatura de 45 a 50 ° C.

O meio permanece vermelho cereja.

Formulários

Use sem suplementos

O ágar BHI sem aditivos é útil como cultura primária e para a semeadura de linhagens puras de microrganismos de baixa ou média exigência para sua posterior identificação.

Por ser um meio de cor clara, é ideal para a observação de pigmentos e, por não conter substâncias interferentes, nele podem ser realizados alguns testes bioquímicos, como oxidase e catalase, ou podem ser montados outros testes bioquímicos a partir de colônias deste. ágar.

Da mesma forma, as cunhas de ágar BHI são amplamente utilizadas para a manutenção de cepas por um certo tempo em laboratório (bacterioteca).

Placas ou cunhas semeadas por superfície com cepas bacterianas são incubadas a 37 ° C por 24 a 48 horas. Enquanto isso, em fungos, a temperatura e o tempo de incubação dependerão do tipo de fungo que está sendo procurado.

Como ágar base para a preparação de outros meios.

Com essa base, meios enriquecidos e seletivos podem ser preparados.

Enriquecido

Sua principal função é servir de base para a preparação de ágar sangue para uso rotineiro em laboratórios de microbiologia. Especialmente, a base BHI é propícia ao isolamento de Streptococcus sp. No entanto, tem a desvantagem de não ser adequado para observar padrões de hemólise porque contém glicose.

É também utilizado na preparação de ágar sangue de coelho ou cavalo para o isolamento de Haemophilus sp. Para melhores resultados, um suplemento de enriquecimento (IsoVitaleX) pode ser adicionado.

Se as amostras vierem do trato respiratório, a bacitracina pode ser adicionada ao ágar para inibir a flora que a acompanha e aumentar a probabilidade de recuperação do Haemophilus sp.

Alternativamente, ágar sangue (cordeiro ou humano) com telurito de cistina pode ser preparado para isolar Corynebacterium diphtheriae. Da mesma forma, é útil preparar ágar sangue de coelho, com adição de cistina e glicose para o isolamento de Francisella tularensis.

A semeadura das placas de ágar sangue é feita por exaustão e são incubadas a 35-37 ° C por 24-48 horas em microaerofilicidade (5-10% CO ₂).

Seletivo

Este meio com adição de antibióticos pode substituir o ágar Sabouraud no isolamento de fungos.

A combinação de ágar BHI com cloranfenicol - gentamicina ou penicilina -, estreptomicina e sangue de cavalo é ideal para o isolamento de Histoplasma capsulatum.

Dependendo do microrganismo a ser isolado, é recomendada a incubação a 35-37 ° C ou à temperatura ambiente em aerobiose. Às vezes, a incubação é necessária em ambas as faixas de temperatura, usando 2 placas para isso.

Alguns fungos, como Trichophyton mentagrophytes, devem ser incubados em temperatura ambiente por até 7 dias.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, recomenda-se incubar 1 placa ou cunha a 37 ° C por 24 horas e verificar se não há crescimento; É especialmente importante ao preparar ágar sangue, porque é um meio facilmente contaminado.

Por outro lado, a qualidade do meio pode ser avaliada inoculando cepas padrão conhecidas ou certificadas e observando seu desenvolvimento.

Nesse sentido, para avaliação do ágar BHI sem aditivos, podem ser utilizadas cepas de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ou Candida albicans ATCC 10231, que são incubadas a 37 ° C em aerobiose por 24 a 48 horas. Em todos os casos, espera-se um crescimento satisfatório.

As cepas de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ou Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 podem ser semeadas para avaliar placas de ágar sangue.

As cepas bacterianas são incubadas a 37 ° C em microaerofilicidade por 24 horas, enquanto o fungo é incubado em temperatura ambiente em câmara úmida por até 7 dias. Espera-se um crescimento satisfatório em todos os casos.

Referências

1. Britannia Laboratories. Agar de infusão de cérebro e coração. 2015. Disponível em: britanialab.com.
2. Laboratórios BD. Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Disponível em: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
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6. Colaboradores da Wikipedia. Infusão de cérebro e coração. Wikipédia, a enciclopédia livre. 19 de setembro de 2018, 03:58 UTC. Disponível em: wikipedia.org. Acessado em 2 de março de 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.