AGAR DE CHOCOLATE: BASE, USOS E PREPARAÇÃO - BIOLOGIA - 2025

O ágar chocolate é um meio de cultura sólido, enriquecido, não seletivo e não diferencial. É utilizado principalmente para o isolamento de microrganismos exigentes do ponto de vista nutricional, embora possa nele crescer qualquer tipo de bactéria.

Por isso, sua utilidade aumenta principalmente na semeadura de amostras normalmente estéreis, como LCR e fluido articular. Embora também esteja incluído no meio escolhido para a semeadura de amostras polimicrobianas, mas nesses casos é necessário adicionar antibióticos que inibam a flora concomitante.

Agar de chocolate com crescimento bacteriano

Este meio tem uma cor castanha característica muito semelhante ao chocolate, daí o seu nome. A preparação é muito semelhante à do ágar sangue, só que neste caso o sangue deve ser aquecido para que os glóbulos vermelhos se decomponham.

Seu preparo, como o ágar sangue, é muito delicado, pois se contamina facilmente. Por isso, muitos laboratórios preferem adquirir este meio já preparado por empresas comerciais que garantem sua qualidade.

Base

Este meio consiste em uma base de ágar rica em nutrientes e sangue aquecido. A hemólise das hemácias fornece o fator X (hemina) e o fator V (NAD), necessários ao crescimento de alguns microrganismos, como o gênero Haemophilus. Também é muito útil para o isolamento de Neisserias sp.

Como o ágar sangue, diferentes meios podem ser usados ​​como ágar base, dependendo da necessidade. Entre os meios utilizados estão a infusão de cérebro e coração e ágar tripticase soja, embora os mais recomendados sejam ágar Columbia, ágar Müeller Hinton, ágar GC e ágar Thayer Martin.

Algumas variantes do ágar chocolate incluem um suplemento fortificado disponível comercialmente chamado Isovitalex ou Polivitex.

Esses suplementos contêm vitamina B ₁₂, L-glutamina, adenina, cloridrato de guanina, ácido p-aminobenzóico, nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD), pirofosfato de tiamina, nitrato férrico, cloridrato de tiamina, cloridrato de cisteína, L-cistina e glicose.

É importante ressaltar que o ágar chocolate é mais enriquecido que o ágar sangue, mas não permite a observação de padrões de hemólise.

Formulários

Fonte: pixnio.com. Autor:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Agar Chocolate preparado com Agar Columbia

Este meio contém digestão pancreática de caseína e coração, digestão péptica de carne, cloreto de sódio, ágar, extrato de fermento e amido de milho. Também é rico em vitaminas, minerais e aminoácidos essenciais.

Esta base de sangue aquecida é ideal para o isolamento de bactérias do gênero Neisseria. Por outro lado, se um suplemento para Brucella for adicionado ao meio, o microrganismo mencionado pode ser isolado. Os resultados são melhorados com sangue de cavalo.

Agar chocolate preparado com agar base GC (para gonococos)

Este meio contém peptonas, amido de milho, tampões monobásico e dibásico, cloreto de sódio e ágar.

A maioria das apresentações de ágar chocolate preparadas comercialmente vêm com essa base e não contêm sangue aquecido, mas uma mistura sintética de hemina e um suplemento químico de fatores de crescimento, vitaminas, minerais, aminoácidos, fator V e glicose.

Agar Chocolate preparado com Agar Müeller Hinton

É usado para testar a susceptibilidade antimicrobiana de microrganismos exigentes, como Streptococcus pneumoniae, usando 5% de sangue de ovelha aquecido.

Também é usado para o isolamento primário de Neisserias e Haemophilus, mas no caso particular do isolamento de Haemophilus, o uso de sangue de cavalo é preferido, pois é uma fonte rica em fator X e V.

Por outro lado, se a amostra a ser semeada vier de área não estéril, recomenda-se a adição de antibióticos para inibir a flora normal da área.

Exemplo para amostras respiratórias em que se suspeita da presença de bactérias do gênero Haemophilus, a bacitracina é usada para inibir o crescimento de Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus e Neisserias saprófitas.

No caso de amostras de cancro genital, onde há suspeita de Haemophilus ducreyi, um ágar chocolate preparado da seguinte forma foi usado com sucesso: ágar Müeller - Hinton com 5% de sangue de cavalo com chocolate, 1% de enriquecimento de Isovitalex e 3 µg / ml de vancomicina.

Agar Chocolate preparado com Agar Thayer Martin

Este meio é especial para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae. Deve conter antibióticos para inibir a flora que o acompanha. Sangue de cordeiro é usado.

Preparação

Você deve ver as indicações para a preparação do ágar base a ser usado. Eles são encontrados na parte de trás do recipiente do meio desidratado. Eles geralmente descrevem quanto você deve pesar para preparar um litro de meio de cultura.

A quantidade exata necessária pode ser preparada em laboratório, pode ser mais ou menos de um litro.

Cálculos

Uma regra de três é usada para calcular quanto pesar para preparar o volume desejado. Exemplo:

Se para 1 litro for necessário pesar 40 gr e o laboratório precisar de 800 ml, diz-se:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

A fórmula será a seguinte:

X = 32 gr (quantidade a pesar para 800 ml).

Pesar e dissolver

A quantidade necessária é pesada e colocada em um frasco com água.

Aqueça em fogo moderado e misture delicadamente com movimentos rotativos até que o meio desidratado se dissolva completamente, deixando ferver por 1 minuto.

Esterilizar

O frasco é colocado na autoclave para esterilizar o meio a 121 ° C por 20 minutos.

Agregado de sangue

Ao sair da autoclave, é deixado em repouso até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 a 70 ° C para colocar o sangue e misturar até que o meio fique marrom.

Se você está adicionando suplementos, esta é a hora de fazê-lo. Em seguida, misture e sirva 20 ml para cada placa de Petri estéril.

Todo o procedimento deve ser feito em uma capela de fluxo laminar ou ao redor do bico de Bunsen.

Deixe repousar até solidificar e guarde invertidos na geladeira.

Outra forma de preparar ágar chocolate sem usar sangue

O meio base é preparado como descrito acima, a hemoglobina desidratada obtida comercialmente é dissolvida e esterilizada na autoclave.

Ambas as soluções podem esfriar até 50 ° C, são unidas e o suplemento é adicionado. Misture sob condições assépticas e sirva em placas de Petri estéreis.

Controle de qualidade

É importante que o sangue seja colocado na temperatura indicada, pois é a ideal para lisar as hemácias e ao mesmo tempo manter o fator V, que é sensível ao calor.

Nenhuma bolha deve permanecer na superfície do ágar. De cada lote de 100 placas, uma ou duas placas devem ser incubadas na estufa a 37 ° C por 24 horas para verificação de sua esterilidade.

Para melhores resultados, ágar chocolate deve ser usado logo após a preparação.

As cepas bacterianas de controle devem ser mantidas em laboratório para avaliar a eficácia do meio fresco para o crescimento dos principais microrganismos fastidiosos de importância clínica.

Referências

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
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5. Colaboradores da Wikipedia. Agar de chocolate. Wikipédia, a enciclopédia livre. 17 de dezembro de 2018, 19:54 UTC. Disponível em: en.wikipedia.org.