AGAR CLED: JUSTIFICATIVA, USOS E PREPARAÇÃO - BIOLOGIA - 2024

O ágar CLED (Cistina-Lactose-Eletrólito-Deficiente) é um meio de cultura sólido diferencial, utilizado para o diagnóstico de infecções do trato urinário. A composição do meio de cultura é projetada para o bom crescimento de patógenos urinários e é ideal para quantificação de unidades formadoras de colônias (UFC).

O meio de cultura CLED é não seletivo, pois nele podem crescer microrganismos Gram negativos e Gram positivos. Mas isso não é um problema, uma vez que a maioria das ITUs são causadas por apenas um tipo de microrganismo.

Ágar CLED

No caso de infecções polimicrobianas, podem ser obtidas 2 ou 3 bactérias diferentes, mas é muito raro e na maioria das vezes são amostras contaminadas.

Entre as bactérias Gram negativas que podem crescer neste meio estão os bacilos pertencentes à família Enterobacteriaceae e outros bacilos entéricos, os uropatógenos mais frequentemente isolados em amostras de urina sendo os seguintes: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, entre outras.

Da mesma forma, entre as bactérias Gram positivas que podem crescer neste meio estão Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp e até mesmo leveduras, como o complexo Candida albicans.

Porém, devido à composição química do meio, ele não permite o crescimento de alguns patógenos geniturinários exigentes, como Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, entre outros.

Justificativa do Agar CLED

O meio de cultura CLED tem como fonte de energia extrato de carne, hidrolisado pancreático de caseína e hidrolisado de gelatina. Eles fornecem os nutrientes para o desenvolvimento de bactérias pouco exigentes.

Também contém cistina, um aminoácido que permite o crescimento de coliformes, distinguível pelo seu pequeno tamanho.

Da mesma forma, contém lactose como carboidrato fermentável, por isso esse meio é diferencial; ser capaz de distinguir as bactérias fermentadoras das não fermentadoras de lactose.

As bactérias fermentadoras fazem com que o pH do meio mude devido à produção de ácidos, desenvolvendo colônias amarelas, enquanto as bactérias não fermentadoras não geram alterações no meio, portanto, assumem a cor do ágar original, verde.

A reação de fermentação é revelada graças à presença do indicador de pH, que neste meio é o azul de bromotimol.

Por outro lado, a baixa concentração de eletrólitos do meio inibe o crescimento invasivo típico do gênero Proteus, chamado de efeito de enxameação. Isso gera uma vantagem em relação a outros meios, pois permite a contagem de UFCs, inclusive se o gênero Proteus estiver presente.

Porém, a baixa concentração de eletrólitos inibe o crescimento de algumas espécies do gênero Shigella, sendo uma desvantagem em relação a outros meios.

Justificativa para ágar CLED (Bevis)

Há uma variante ou modificação desse meio feita por Bevis, que incorporou a fucsina ácida (indicador de Andrade) à composição original. Ele funciona em conjunto com o azul de bromotimol para diferenciar bactérias em fermentação das não fermentadoras.

A diferença entre o meio convencional e o meio modificado é a cor que as colônias assumem. No caso das bactérias fermentadoras de lactose, as colônias tornam-se laranja-avermelhadas com um halo rosa ou vermelho, enquanto as não fermentadoras são cinza-azuladas.

Formulários

O ágar CLED é usado exclusivamente para a semeadura de amostras de urina. O uso desse meio é especialmente frequente em laboratórios europeus, enquanto na América é menos usado.

A coleta de amostra deve atender a certos parâmetros para obter resultados confiáveis, incluindo:

• Não tome antibióticos antes da amostragem.
• De preferência, retirar a urina logo pela manhã, pois é mais concentrada, quando não é possível colher a amostra por métodos invasivos.
• Lave bem os órgãos genitais antes de colher a amostra.
• Descarte o primeiro jato de urina e coloque o recipiente.
• Colete 25 a 30 ml de urina em um recipiente estéril bem rotulado.
• Leve imediatamente para o laboratório rodeado de gelo.
• Deve ser processado dentro de 2 horas após a emissão ou refrigerado a 4 ° C por no máximo 24 horas.

Semeando amostras de urina

A amostra de urina deve ser diluída 1:50.

Para diluição, coloque 0,5 ml de urina do paciente e dilua com 24,5 ml de solução fisiológica estéril.

Meça 0,1 ml da urina diluída e espalhe na superfície com uma espátula drigalski no meio CLED. Este é o melhor método de semeadura para contagem de colônias. Por esse motivo é utilizado em amostras de urina, pois os resultados devem ser expressos em UFC / ml.

Para quantificar as colônias obtidas, proceda da seguinte forma: conte as colônias na placa e multiplique por 10 e depois por 50. Isso dá a quantidade de UFC / ml de urina.

Interpretação

Contagens acima de 100.000 UFC / ml - indica infecção urinária

Contagens abaixo de 1000 CFU / ml-– Sem infecção

Contagens entre 1000-10.000 CFU / ml - Duvidoso, possível contaminação, repetir a amostragem.

EU IRIA

As colônias cultivadas em ágar CLED devem ter um Gram e dependendo das características morfotintoriais do microrganismo, uma determinada subcultura é realizada.

Por exemplo, se for um bacilo Gram negativo, será semeado em ágar MacConkey, onde seja comprovada a fermentação ou não da lactose. Além disso, um ágar nutriente é anexado para realizar o teste da oxidase.

Caso o Gram revele cocos Gram-positivos, pode ser subcultivado em ágar manitol salgado e ágar nutriente. Neste último, é realizado o teste da catalase. Finalmente, se forem observadas leveduras, será semeado em ágar Sabouraud.

Muitos laboratórios evitam o uso do meio CLED e preferem usar apenas ágar sangue, MacConkey e ágar nutriente para semear as amostras de urina.

Preparação

Em um frasco com um litro de água destilada, dissolva 36,2 g de ágar CLED em pó. Após 5 minutos em repouso, aqueça o ágar ressuspenso, mexendo constantemente para ferver por 1 minuto.

Em seguida, esterilize a 121 ° C por 15 minutos na autoclave. Ao final do tempo, é retirado da autoclave e deixado resfriar a uma temperatura de 45 ° C. Posteriormente, 15-20 ml são servidos em cada placa de Petri estéril.

O procedimento de servir o prato deve ser realizado dentro de uma capela de fluxo laminar ou na frente do bico de Bunsen para evitar contaminação.

Os pratos servidos são deixados para solidificar, dispostos em uma grade invertida e armazenados na geladeira (2-8 ° C) até o uso.

O pH final do meio preparado deve ser 7,3 ± 0,2.

Referências

1. Recomendações para o diagnóstico microbiológico de infecção urinária. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Disponível em: scielo.org.
2. Panchi J. Identificação do agente microbiano que causa infecções do trato urinário em pacientes hospitalizados submetidos a cateterismo vesical. 2016. Trabalho de graduação para obtenção do título de Bacharel em Laboratório Clínico. Universidade Técnica de Ambato. Equador.
3. Britannia Laboratories. Meio CLED. Disponível em: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Instruções de uso, CLED Agar. 2013 Disponível em: es.renylab.ind.br.
5. Laboratórios Cultivados. Manual Básico de Microbiologia. Disponível em: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. A opção de ágar CLED na rotina de cultura de urina. Uma avaliação prospectiva e comparativa. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações UCA.