AGAR SALMONELLA-SHIGELLA: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O ágar Salmonella Shigella também conhecido como ágar SS é um meio seletivo e diferencial moderadamente, desenvolvido especialmente para o isolamento de bactérias enteropatogênicas dos gêneros Salmonella e Shigella, tanto de amostras ambientais como clínicas.

O ágar SS tem uma composição complexa; É composto por extrato de carne, peptona, lactose, sais biliares, citrato de sódio, tiossulfato de sódio, citrato férrico, ágar, vermelho neutro, verde brilhante e água destilada. Dada a sua grande seletividade, podem ser semeadas amostras com abundante flora mista.

Agar SS com colônias de Salmonella sp. Fonte: Manurx27, do Wikimedia Commons

Em laboratórios de microbiologia, o meio Salmonella-Shigella é amplamente utilizado para investigar a presença de Salmonella e Shigella em amostras de fezes diarreicas, esgoto, água potável e alimentos.

Às vezes é necessário usar caldo de pré-enriquecimento (caldo de lactose) e caldo de enriquecimento (caldo de selenito cistina) para recuperar cepas de Salmonella.

Essas etapas são necessárias quando se suspeita da existência de Salmonella em quantidade muito baixa, ou quando a cepa pode ser abusada por processos de produção industrial, principalmente alimentos processados. Também é aconselhável enriquecer as amostras de fezes de pacientes que foram tratados com antibióticos.

Posteriormente, o caldo enriquecido pode ser semeado em ágar Salmonella-Shigella e outros meios semelhantes, como ágar xilose, lisina desoxicolato (XLD) e ágar entérico Hektoen (HE).

Base

Cada componente do meio de cultura Salmonella-Shigella tem uma função específica, e a mistura como um todo lhe confere as propriedades que o caracterizam.

Poder nutritivo

O extrato de carne e a peptona (digerida com caseína e tecido animal) fornecem os nutrientes necessários (nitrogênios, carbono e vitaminas) para o desenvolvimento de microrganismos capazes de tolerar o resto dos componentes.

Consistência

O ágar-ágar é responsável por dar consistência sólida ao meio.

Seletivo

Este meio é altamente seletivo porque contém sais biliares, citrato de sódio e verde brilhante. Portanto, ele inibe o crescimento de todas as bactérias Gram positivas e da maioria dos bacilos Gram negativos, incluindo alguns coliformes.

Enquanto as bactérias do gênero Salmonella e algumas cepas de Shigella suportam esses compostos.

Principalmente, o gênero Salmonella é muito resistente aos sais biliares, tanto que são capazes de viver na vesícula biliar de alguns pacientes portadores que constantemente eliminam a bactéria em suas fezes.

Diferencial

A lactose é o carboidrato fermentável que ajuda a diferenciar as cepas que fermentam a lactose das não fermentadoras. Esta propriedade é evidenciada pela presença do indicador de pH, que neste meio é vermelho de fenol.

As cepas que fermentam a lactose dão colônias vermelhas, enquanto as cepas não fermentadoras são incolores. Essa característica é importante, pois Salmonella e Shigella não fermentam lactose.

Por outro lado, este meio contém tiossulfato de sódio como fonte de sulfeto e citrato férrico como fonte de ferro. Ambos os compostos são capazes de diferenciar bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio. Estes reagem para formar um precipitado de sulfeto férrico preto, insolúvel e visível.

Esta propriedade é encontrada em algumas linhagens do gênero Salmonella. Normalmente suas colônias são planas e incolores com um ponto preto no centro. O resto das Salmonelas não produzem H ₂ S e se desenvolvem como colônias incolores.

Por outro lado, as colônias do gênero Shigella são planas e incolores sem escurecimento.

Preparação

Este meio é muito simples de preparar.

Pesar 63 g do meio comercial desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Aqueça a solução e mexa. A mistura pode ferver por até minutos.

Este meio não deve ser autoclavado. Depois de dissolvido, é servido diretamente em pratos esterilizados simples ou duplos.

Quando se solidificam, são dispostos de forma invertida nas plaquetas e armazenados no refrigerador (2-8 ° C) até o uso.

O meio após a preparação deve permanecer a pH 7,2 ± 0,2 e com uma cor laranja avermelhada.

É importante permitir que as placas aqueçam antes de semear as amostras. A amostra original pode ser semeada diretamente, descarregando o material em uma parte do ágar e depois espalhando a partir daí.

No caso de usar caldos enriquecidos, passe uma porção do caldo selenito e semeie com espátula drigalski.

Incubar a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Lembre-se que a quantidade de gramas a pesar e o pH final do meio podem variar de uma casa comercial para outra. A base do meio sempre traz as indicações para seu preparo.

Usar

É frequentemente usado em análises de cultura de fezes e no estudo microbiológico de águas residuais, água potável e amostras de alimentos.

Freqüentemente, placas duplas são preparadas, em um lado do ágar Salmonella-Shigella é colocado e no outro ágar XLD.

Limitações

-Algumas cepas de Shigella não crescem neste meio. Portanto, não é recomendado para isolamento primário deste gênero.

-Nem toda colônia transparente com um centro preto é indicativa de Salmonella; Testes bioquímicos devem ser realizados para uma correta identificação, uma vez que as colônias de algumas cepas de Proteus são indistinguíveis das de Salmonella.

-O meio desidratado deve cuidar da exposição ao meio ambiente, pois é muito higroscópico. Portanto, deve ser mantido em ambiente seco e bem fechado. Aberto por períodos muito curtos.

- Com o passar do tempo os sais biliares do meio podem precipitar, formando uma imagem semelhante a uma esteira dentro do ágar, mas isso não afeta os resultados.

-Algumas cepas de Shigella podem fermentar lentamente a lactose.

Controle de qualidade

Para comprovar o bom funcionamento do meio, é aconselhável plantar cepas controle conhecidas ou certificadas e observar se o crescimento atende às características esperadas.

Para tanto, podem ser utilizadas cepas de E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium ou Enterococcus faecalis.

Os resultados esperados são:

Enterobacter e Klebsiella ------ grandes colônias e mucoides vermelhos ou rosa.

Shigella flexneri ---------- colônias planas transparentes ou incolores.

Salmonella typhimurium ------ colônias incolores com centros pretos.

Enterococcus faecalis -------- inibição total.

Referências

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2009. Disponível em: f-soria.es
2. Laboratório BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Disponível em: bd.com
3. Britannia Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2015. Disponível em: britanialab.com
4. Diagnósticos Valtek. Agar Salmonella-Shigella (Agar SS). 2010. Disponível em: andinamedica.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Koneman E, Allen S, Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Editorial Panamericana SA Argentina.