AGAR TRIPTICASEÍNA SOJA: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O ágar soja triptona ou Ágar Trypticase Soy é um meio de cultura sólido, nutricionalmente não seletivo. É designado pelas letras TSA por sua sigla em inglês Trypticase Soy Agar. É composto de tripteína, peptona de soja, cloreto de sódio e ágar-ágar.

Devido ao seu alto poder nutritivo, é ideal para o cultivo de microrganismos moderadamente exigentes e não exigentes. Meio sem suplementos adicionais não é recomendado para culturas primárias, mas é muito útil para subcultivar cepas puras e mantê-las viáveis, entre outros usos.

Fatias de ágar soja tripticaseína em tubos com tampas de baquelite. Fonte: Fotografia tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Além disso, este ágar serve de base para a preparação de meios enriquecidos como o ágar sangue, especialmente quando é necessário observar os padrões de hemólise e montar os táxons de optoquina e bacitracina, necessários no diagnóstico de Streptococcus pneumoniae e Streptococcus pyogenes respectivamente.

Por outro lado, quando combinado com antibióticos, é útil para isolar microorganismos facultativos e anaeróbios estritos clinicamente importantes de amostras com flora mista.

Finalmente, a composição do ágar tripticaseína soja e seu desempenho atendem aos requisitos estabelecidos pelas diferentes farmacopéias (europeia, japonesa e norte-americana).

Base

Para o bom desenvolvimento das bactérias, é necessária a presença de suprimentos de energia, como aminoácidos, vitaminas, bases puricas e pirimídicas.

Nesse sentido, a tripteína e a peptona de soja fornecem esses nutrientes aos microrganismos, permitindo seu pleno desenvolvimento. No entanto, para bactérias fastidiosas é necessário suplementar este ágar com sangue desfibrinado ou sangue aquecido para aumentar seu enriquecimento.

Por outro lado, se forem adicionados antibióticos ao meio, ele se torna um meio seletivo. O extrato de levedura de 0,6% também pode ser adicionado para favorecer o isolamento de espécies do gênero Listeria, enquanto a adição de telurito de cistina e sangue de cordeiro é ideal para Corynebacterium diphteriae.

Finalmente, o cloreto de sódio fornece o equilíbrio osmótico ao meio e o ágar fornece a consistência sólida.

Preparação

Placas de Agar de Soja Trypticasein

Para o preparo do ágar tripticaseína soja, 40 g do meio comercial desidratado devem ser pesados ​​em balança digital. É dissolvido em um litro de água destilada contida em um frasco.

A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e depois levada a uma fonte de calor para ajudar na dissolução do meio. Deve ser mexido com freqüência e fervido por 1 a 2 minutos. Posteriormente, o meio é esterilizado em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe esfriar até 50 ° C e distribua em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverta, encomende em plaqueros e guarde na geladeira.

O pH final do meio deve ser 7,3 ± 0,2.

Ressalta-se que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenado entre 10 a 35 ° C, em local seco.

Por sua vez, o ágar preparado é de cor âmbar claro. As placas preparadas devem ser armazenadas no refrigerador (2-8 ° C) até o uso.

As placas devem atingir a temperatura ambiente antes do uso.

Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue

O ágar sangue é preparado adicionando 5% de sangue desfibrinado no momento do resfriamento do ágar tripticaseína soja a 50 ° C. A mistura é homogeneizada por rotação com movimentos suaves.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. A cor do meio deve ser vermelho cereja.

Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue aquecido

Para preparar o ágar sangue à base de TSA, proceda da mesma forma que os procedimentos já descritos, mas ao sair da autoclave é deixado em repouso até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 a 70 ° C. Nesse momento, o sangue é colocado e misturado até que o meio fique marrom.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. A cor do meio é marrom chocolate.

Trypticasein Soy Agar Wedges

O procedimento de preparo do ágar é o mesmo descrito para as placas, com a diferença que ao invés de servir o meio em placas de Petri, ele é distribuído de 10 a 12 ml em tubos com tampas de baquelite antes da esterilização.

Posteriormente, os tubos são autoclavados a 121 ° C por 15 minutos. Quando eles saem, eles são inclinados com a ajuda de um suporte e podem se solidificar.

As cunhas preparadas são semeadas por área de superfície e servem para manter certos microorganismos não exigentes viáveis ​​por um tempo especificado.

Formulários

O Ágar de Soja Trypticasein é usado nos seguintes casos:

-Como base para preparar o ágar sangue clássico, usado rotineiramente na maioria dos laboratórios.

-O isolamento de bactérias exigentes.

-Observação do padrão de hemólise.

-Execução de testes de diagnóstico.

-Como base para a preparação de ágar sangue especial para Corynebacterium diphteriae, com telurito de cistina e sangue de cordeiro.

-Como base para preparar ágar sangue de cordeiro, mais canamicina-vancomicina para o crescimento de anaeróbios, especialmente Bacteroides sp.

- Para a manutenção de cepas não exigentes (Bacterioteca).

- Contagem microbiana aeróbia no estudo do limite microbiano de amostras de água, ambiente, alimentos e cosméticos.

Semeado

As amostras podem ser semeadas diretamente na superfície do Ágar de Soja Trypticasein suplementado com sangue ou outros aditivos. É semeado pela exaustão.

Considerando que, placas de ágar tripticaseína soja sem aditivos são geralmente usadas para subcultivar cepas microbianas (bactérias ou leveduras).

Controle de qualidade

Controle de esterilidade

Para verificar a esterilidade dos diferentes meios preparados com ágar tripticaseína à base de soja, o seguinte é recomendado: de cada lote preparado, 1 ou 2 placas ou tubos não inoculados devem ser incubados a 37 ° C por 24 horas para demonstrar sua esterilidade. Em todos os casos, deve permanecer sem crescimento.

Se houver contaminação, todo o lote deve ser descartado.

Controle de crescimento

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para estudar o funcionamento adequado de ágar tripticaseína soja: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 e Enterococcus faecalis ATCC 29212.

As cepas são semeadas e incubadas aerobicamente a 37 ° C por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório.

Também podem ser usados ​​fungos como Candida albicans Complex ATCC 10231 e Aspergillus niger ATCC 16404. Espera-se um bom crescimento para ambas as cepas.

Controle de crescimento e padrão de hemólise de ágar tripticaseína soja suplementado com sangue

Para verificar o funcionamento adequado do ágar sangue preparado com esta base, podem ser utilizadas as seguintes cepas: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 e Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Eles são semeados e incubados a 37 ° C em microaerofilicidade por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório, levando-se em consideração que a beta-hemólise (halo leve ao redor da colônia) deve ser observada em S. pyogenes e a alfa hemólise (halo esverdeado ao redor da colônia) deve ser observada em ambas as cepas de S. pneumoniae. colônias).

Referências

1. Colaboradores da Wikipedia. Trypticase I am agar. Wikipédia, a enciclopédia livre. 17 de dezembro de 2018, 15:47 UTC. Disponível em:
2. Britannia Laboratories. Ágar tripteína de soja. 2015. Disponível em: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Ágar soja tríptica. Disponível em: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Laboratórios BD. Trypticase I am Agar. 2014. Disponível em:.bd.com