ÁGAR VERDE BRILHANTE: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O ágar verde brilhante é um meio de cultura sólido com alto grau de seletividade. É utilizado exclusivamente para o isolamento de cepas do gênero Salmonella, porém existem algumas exceções, como as espécies typhi e paratyphi que não crescem neste meio.

A busca pelo gênero Salmonella é frequente em amostras de fezes, água ou alimentos. Nesse sentido, esse meio pode ser muito útil. Este ágar foi criado em 1925 por Kristensen, Lester e Jurgens, posteriormente modificado por Kauffmann.

Ágar verde brilhante. Colônias com e sem fermentação, respectivamente. Fonte: MJ Richardson / exposição Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

É composto por pluripeptonas da digestão péptica do tecido animal e da digestão pancreática da caseína, também contém extrato de levedura, cloreto de sódio, lactose, sacarose, vermelho de fenol, verde brilhante e ágar-ágar.

Caracteriza-se por ser um ambiente bastante inóspito para a maioria das bactérias, favorecendo o crescimento de Salmonella, porém alguns coliformes são capazes de subsistir nele, desenvolvendo-se fracamente.

É importante notar que o gênero Shigella não cresce neste meio, nem Salmonella typhimurium ou Salmonella paratyphi. Portanto, se você deseja isolar esses microrganismos, outros meios devem ser usados, como ágar XLD, entre outros.

Base

Ágar verde brilhante

Cada um dos componentes que compõem o meio cumpre uma função específica que determina as características e propriedades do ágar.

Os pluripeptonos e o extrato de levedura são a fonte de nutrientes dos quais os microrganismos retiram o nitrogênio e os minerais necessários para seu desenvolvimento. Lactose e sacarose são fontes de energia para microrganismos capazes de fermentá-los.

O verde brilhante é a substância inibidora que impede o crescimento de bactérias Gram positivas e de um grande número de microrganismos Gram negativos.

O cloreto de sódio fornece estabilidade osmótica ao meio. Embora o vermelho de fenol seja o indicador de pH, ele muda de cor ao detectar a produção de ácido da fermentação de carboidratos.

Colônias não fermentadoras de lactose e sacarose crescem neste meio em uma cor rosada ou branco transparente, sobre um fundo vermelho. Por exemplo, bactérias do gênero Salmonella.

Enquanto as bactérias fermentadoras de lactose ou sacarose, capazes de crescer neste meio, desenvolvem colônias verde-amarelo ou verde-amarelo em um fundo amarelo-esverdeado. Por exemplo, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae.

Variantes de ágar verde brilhante (BGA)

Existem outras variantes de ágar verde brilhante; Ágar de glicose verde brilhante de novobiocina (NBG) e ágar de lactose de glicerol verde brilhante de novobiocina (NBGL).

Agar de glicose verde brilhante de novobiocina

Contém Trypticase Soy Agar, Férrico Ammonium Citrate, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glucose, Bright Green, Novobiocin e Água Destilada.

É usado para o isolamento de colônias de Salmonella em amostras de fezes.

Nesse caso, o verde brilhante e a novobiocina são as substâncias inibidoras que impedem o crescimento de bactérias Gram positivas e de alguns microrganismos Gram negativos.

O tiossulfato de sódio é a fonte de sulfeto e o citrato férrico é a fonte de ferro, ambos necessários para revelar a produção de sulfeto de hidrogênio por meio da formação de um precipitado preto de sulfeto férrico.

A glicose é o carboidrato fermentável e o vermelho de fenol é o indicador de pH.

Neste meio, as colônias de Salmonella se desenvolvem grandes com um centro preto rodeado por um halo avermelhado e seguido por uma área clara e visível. Algumas cepas de Citrobacter freundii produzem colônias idênticas às de Salmonella.

Ágar de lactose com glicerol verde brilhante de novobiocina (NBGL)

Este meio contém ágar tripticase soja, citrato férrico de amônio, tiossulfato de sódio, lactose, glicerol, verde brilhante, novobiocina e água destilada.

A diferença entre esse meio e o anterior é que a glicose é substituída pela lactose e o glicerol e o vermelho de fenol não é utilizado.

O meio também é usado para isolar espécies de Salmonella, as colônias desenvolvem-se pretas, devido à produção de sulfeto de hidrogênio.

Apenas as colônias que não produzem ácido a partir do glicerol ou lactose alcançam produção suficiente de H ₂ S, porque o baixo pH interfere na formação de H ₂ S. Isso resulta em colônias incolores para a maioria das espécies de Proteus e Citrobacter.

Preparação

-Peso 58 gramas do meio desidratado obtido comercialmente. Adicione a um litro de água redestilada. Misture, deixe repousar alguns minutos e coloque a mistura em uma fonte de calor até dissolver completamente.

-Autoclave a 121 ° C por 15 minutos, não ultrapassar o tempo de esterilização.

-Deixe descansar e sirva ainda quente em placas de Petri esterilizadas. O pH final deve ser 6,9 ± 0,2.

-Vamos solidificar e guardar na geladeira até o uso. Antes de semear as placas devem levar à temperatura ambiente.

-O meio em pó é de cor verde e o preparado pode apresentar cor laranja-acastanhada ou verde-avermelhada, dependendo do pH e da empresa comercial. Uma cor muito marrom é indicativa de que o ágar foi superaquecido.

-Uma vez que o ágar solidificou, não é recomendável reformulá-lo, pois o meio se deteriora.

Usos / aplicações

Este meio é usado para pesquisar cepas do gênero Salmonella em amostras de fezes e laticínios, entre outros.

Por ser um ambiente bastante inóspito, é aconselhável semear um inóculo abundante se for utilizada amostra direta. Caso contrário, um pré-enriquecimento e enriquecimento das amostras deve ser feito antes da semeadura neste meio.

Como algumas cepas de Salmonella são inibidas ou crescem com dificuldade, é aconselhável acompanhar este meio com outro ágar seletivo para Salmonella.

Toda colônia com característica típica de Salmonella deve ser submetida a testes bioquímicos para sua identificação definitiva.

Controle de qualidade

Para testar o bom desempenho do meio de ágar verde brilhante, as cepas ATCC podem ser usadas para observar seu desenvolvimento nele.

As cepas mais freqüentemente utilizadas para controle de qualidade são: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

As primeiras 3 devem dar colônias brancas rosadas ou transparentes em um fundo vermelho. Salmonella com bom desenvolvimento e Proteus com crescimento pequeno ou regular.

Para Klebsiella e Escherichia, são esperadas colônias amarelo-esverdeadas com fundo amarelo e, no caso de Shigella e Staphylococcus, devem ser inibidas.

O meio desidratado deve ser armazenado em temperatura ambiente, em local seco, pois o meio é muito higroscópico.

Referências

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Ágar Verde Brilhante. 2009
2. Laboratório Britannia. Ágar Verde Brilhante. 2015
3. Laboratório BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W., Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA