- Base
- Fornecimento de nutrientes
- Poder seletivo
- Poder diferencial
- Equilíbrio osmótico e agente de solidificação
- Preparação
- Solução de telurito de potássio 1% w / v
- Meio base de agar Vogel-Johnson
- Usar
- Controle de qualidade
- Referências
O ágar Vogel-Johnson é um meio sólido de cultura seletivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Staphylococcus aureus. Este meio foi criado por Vogel e Johnson em 1960 a partir da modificação do ágar telurito glicina formulado em 1955 por Zebovitz, Evans e Niven.
A modificação consistiu no aumento da concentração de manitol presente no meio e na incorporação de um indicador de pH. A fórmula atual é composta por tripteína, extrato de levedura, manitol, fosfato dipotássico, cloreto de lítio, glicina, vermelho de fenol, ágar, solução de telurito de potássio a 1% e água.
Fonte: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.
Deve-se notar que existem outros meios que, como o ágar Vogel-Johnson, são seletivos para o isolamento de S. aureus, como o ágar manitol salgado e ágar Baird Parker. Nesse sentido, pode-se dizer que a base do ágar Vogel-Johnson é uma mistura entre ágar manitol salgado e ágar Baird Parker.
No primeiro, as colônias de S. aureus se distinguem pela fermentação do manitol e pela mudança do indicador de pH para amarelo. Por outro lado, no segundo, S. aureus é caracterizado por reduzir telurito a telúrio e formar colônias cinza a pretas. Ambas as propriedades são observadas no ágar Vogel-Johnson.
Este meio, como suas contrapartes, é útil para a detecção de Staphylococcus aureus em amostras de alimentos, controles sanitários de produtos industriais e em amostras clínicas.
Base
Fornecimento de nutrientes
O meio Vogel-Johnson contém tripteína e extrato de levedura; Ambas as substâncias fornecem aminoácidos de cadeia longa que servem como fontes de carbono e nitrogênio necessários para o crescimento bacteriano. As bactérias capazes de crescer neste meio absorvem os nutrientes dessas substâncias.
Poder seletivo
O ágar Vogel-Johnson é capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram negativas e até mesmo algumas bactérias Gram positivas, favorecendo o desenvolvimento de estafilococos coagulase positivos. As substâncias inibidoras são telurito de potássio, cloreto de lítio e glicina.
Poder diferencial
As substâncias que compõem esse meio diferencial são o manitol e o telurito de potássio. O manitol é um carboidrato e, quando fermentado, são produzidos ácidos que fazem o meio passar de vermelho para amarelo, o que acontece graças à presença do indicador de pH fenol vermelho.
Já o telurito incolor, quando reduzido a telúrio metálico livre, assume uma coloração cinza escuro a preta.
O Staphylococcus aureus fermenta o manitol e reduz o telurito a telúrio. Por esta razão, as colônias típicas de S. aureus neste meio são cinza ou pretas rodeadas por um meio amarelo.
As bactérias que crescem neste meio e não reduzem o telurito nem fermentam o manitol formarão colônias transparentes circundadas por um meio de cor vermelha, ainda mais intensas que a cor original, devido à alcalinização do meio pelo uso de peptonas.
Por outro lado, as bactérias que reduzem a telurita, mas não fermentam o manitol, crescerão como colônias cinza ou pretas rodeadas por um meio vermelho escuro.
Se o meio fosse preparado sem a adição de telurito de potássio, as colônias de S. aureus se desenvolveriam como colônias amarelas, circundadas por meio amarelo, como no ágar manitol salgado.
Equilíbrio osmótico e agente de solidificação
O fosfato dipotássico mantém o equilíbrio osmótico do meio e ajusta o pH à neutralidade 7,2. Enquanto o ágar dá consistência sólida ao meio de cultura.
Preparação
Solução de telurito de potássio 1% w / v
Esta solução não é incluída no meio desidratado, pois não pode ser esterilizada em autoclave. Por isso é preparado separadamente e adicionado ao meio já esterilizado.
Algumas casas comerciais vendem a solução de telurito de potássio a 1% pronta para uso. Se você deseja se preparar em laboratório, proceda da seguinte forma:
Pesar 1,0 g de telurito de potássio e medir 100 ml de água destilada. Dissolva o telurito de potássio em uma parte da água e complete a quantidade de água até atingir 100 ml. Esterilize a solução pelo método de filtração.
Meio base de agar Vogel-Johnson
Pesar 60 gr do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura é aquecida até à ebulição para ajudar na dissolução completa. Durante o processo de dissolução, o meio é agitado frequentemente.
Esterilize em autoclave a 15 libras de pressão e 121 ° C por 15 minutos. Retire da autoclave e deixe descansar até que o meio atinja uma temperatura de aproximadamente 45 a 50 ° C. Adicione 20 ml da solução de telurito de potássio a 1% previamente preparada.
Misture e despeje em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar e peça invertido nos porta-pratos para depois guardar na geladeira até o uso.
O pH final do meio preparado deve ser 7,2 ± 0,2.
Antes de semear uma amostra, espere a placa atingir a temperatura ambiente.
A cor do meio preparado é vermelha.
Usar
Embora possa ser utilizado para o isolamento de S. aureus em qualquer tipo de amostra, é utilizado principalmente para análises microbiológicas de produtos farmacêuticos, cosméticos e alimentos.
Recomenda-se que o inóculo seja denso. A semeadura pode ser feita pontuando com cabo de platina ou superficie com espátula Drigalski.
As placas são incubadas a 35-37 ° C durante 24 a 48 horas de aerobiose.
Controle de qualidade
As seguintes cepas de controle podem ser usadas para realizar o controle de qualidade no meio Vogel-Johnson:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071.
O resultado esperado é o seguinte: para cepas de S. aureus crescimento satisfatório com colônias pretas rodeadas por meio amarelo. Para S. epidermidis crescimento regular com colônias translúcidas ou pretas rodeadas por meio vermelho.
Da mesma forma, a inibição total é esperada para E. coli, e inibição parcial ou total para Proteus mirabilis; se crescer, o fará com moderação e as colônias serão pretas rodeadas por uma cor vermelha.
Referências
- Laboratórios BD. VJ (Vogel e Johnson Agar). 2006. Disponível em: bd.com
- Britannia Laboratories. Agar Vogel-Johnson. 2015. Disponível em: britanialab.com
- Britannia Laboratories. Telurito de potássio. 2015. Disponível em: britania.com
- Laboratório de Himedia. Meio Ágar Vogel-Johnson. 2018. Disponível em: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Base de Agar Vogel-Johnson. Merck Microbiology Manual. 12ª Edição, páginas 502-503. Disponível em: Usuários / Equipe / Downloads
- Colaboradores da Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia uma enciclopédia gratuita, disponível em: wikipedia.org.
- Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Alimentos. Isolamento e enumeração de Staphylococcus aureus. Disponível em: sencamer.gob.ve