ÁGUA PEPTONADA: JUSTIFICATIVA, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

A água peptonada é um meio de enriquecimento líquido, não seletivo, utilizado principalmente como diluente de amostras de alimentos ou outros materiais. Este meio do ponto de vista químico é muito simples, contém peptona de carne, cloreto de sódio e água.

Tem um certo valor nutricional, permitindo enriquecer a amostra. Se houver abuso de bactérias, este meio tem o poder de reparar a viabilidade. É especialmente útil na recuperação de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae.

Água peptonada em garrafas. Fonte: MSc. Marielsa gil

No caso da recuperação de Salmonellas, o uso da variante de água peptonada buffet é recomendado; Este serve como meio de pré-enriquecimento para a amostra, neste caso contém outros elementos como fosfato dissódico e fosfato dipotássico.

Normalmente, a peptona água é preparada em pH neutro, porém existem outras variantes onde é necessário que o pH seja 8,5 ± 0,2 (alcalino), porque a bactéria a ser isolada é alcalifílica, como a Vibrio cholerae.

Além disso, este meio pode ser usado como meio de base para testes de fermentação de carboidratos.

Base

Peptonas fornecem os nutrientes necessários para o crescimento bacteriano, especialmente nitrogênio e aminoácidos de cadeia curta, enquanto o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico.

Além disso, o meio permite dispersar, homogeneizar e reparar células bacterianas danificadas por processos industriais.

Como diluente é ideal, substituindo efetivamente a solução fisiológica (SSF) ou a solução tampão de fosfato (PBS).

O crescimento bacteriano é evidente pela observação de sua turbidez.

Preparação

Preparação caseira (não comercial)

Pesar 1 g de peptona e 8,5 g de cloreto de sódio, dissolver em 1 litro de água destilada. O pH deve ser ajustado para 7,0. Para isso, pode ser usado cloreto de sódio 1N.

Preparação usando meio comercial

Pesar 15 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Homogeneizar a mistura. Se necessário, a mistura é fervida por 1 minuto para auxiliar na dissolução total. Sirva em frascos de 100 ml ou tubos de 10 ml, conforme necessário. Autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Resfrie e use ou guarde na geladeira. O pH final do meio é 7,2 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar claro.

Preparação para testes de fermentação

Ao preparo anterior - antes da esterilização - deve-se adicionar o carboidrato até a concentração final de 1%, mais o indicador Andrade (fucsina ácida) ou vermelho de fenol (0,018 g / L). Os tubos devem ser equipados com um sino Durham para observar a formação de gás.

Outras variantes de água peptonada

Água peptonada tamponada ou tamponada

Contém hidrolisado enzimático de caseína, cloreto de sódio, fosfato di-hidrogenado de potássio e hidrogenofosfato de sódio dodeca-hidratado. O pH final é 7,0 ± 0,2.

Para a sua preparação pesar 20 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. Deixe descansar por aproximadamente 5 minutos. Aquecer por 1 minuto até dissolver completamente.

Despeje em potes adequados, conforme necessário. Esterilize usando autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

- Água peptonada alcalina

Pesar 25 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. Proceda conforme descrito acima. O pH varia de 8,3 a 8,7.

Usar

O inóculo é feito colocando a amostra diretamente.

É usado para diluir amostras, especialmente quando há suspeita de que possam haver bactérias danificadas. Normalmente, as diluições são 1:10 e 1: 100.

Incubar por 24 horas em aerobiose a 35-37 ° C.

Amostras de fezes

Para amostras de fezes para Salmonella, o uso de água tamponada ou tamponada é recomendado como meio de pré-enriquecimento.

Para fazer isso, proceda da seguinte forma:

Se houver formação de fezes, colher 1 g de amostra. Se forem líquidos, pegue 1 ml de fezes e suspenda em um tubo com 10 ml de água peptonada triturada. No caso de esfregaços retais, descarte o material contido no esfregaço no tubo com água peptonada tamponada.

Em todos os casos, misture e homogeneize muito bem a amostra.

Incubar a 37 ° C por 18 a 24 horas. Subseqüentemente, subcultura em um caldo de enriquecimento, como caldo de selenita cistina ou caldo de tetrationato a 37 ° C por mais 18-24 horas. Por fim, cultivar em meios seletivos para Salmonella, como ágar SS, ágar XLD, ágar Hektoen, entre outros.

Amostras de alimentos

Água peptonada é usada como meio de enriquecimento ou como diluente simples, mas se forem procuradas espécies de Salmonella, é usada como meio de pré-enriquecimento, conforme já descrito.

Na alimentação, proceda da seguinte forma:

Para alimentos sólidos pesar 25 g da amostra e para alimentos líquidos medir 25 ml. Coloque a referida porção em frascos contendo 225 ml de água peptonada. Misture e homogeneize a amostra.

Se houver suspeita de carga microbiana elevada, podem ser feitas diluições em série ou decimais para facilitar a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC).

O número de diluições dependerá do tipo de amostra e da experiência do analista.

Se, pelo contrário, houver suspeita de que a carga microbiana é muito baixa, não é necessário efetuar diluições. Posteriormente, subcultura em meio seletivo.

No caso de alimentos do mar, como mariscos, peixes, entre outros, em busca de Vibrio cholerae ou outras espécies de Vibrio, deve-se utilizar água peptonada com pH 8,5 (água peptonada alcalina).

Controle de qualidade

De cada lote preparado, um a dois tubos devem ser incubados sem inoculação por 24 horas em aerobiose a 37 ° C. No final do tempo, nenhuma turbidez ou mudança de cor deve ser observada.

As cepas de controle conhecidas também podem ser usadas para avaliar sua eficácia:

Para isso, as seguintes cepas bacterianas podem ser usadas: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Em todos os casos, é esperado um desenvolvimento microbiano satisfatório, o que é observado pela turbidez do meio.

Limitações

-O meio desidratado é muito higroscópico, por isso deve ser mantido longe da umidade.

-O meio não deve ser usado se for observado qualquer tipo de deterioração.

- O meio de cultura desidratado deve ser armazenado entre 10 - 35 ° C

-O meio preparado deve ser mantido refrigerado (2-8 ° C).

Referências

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. Técnicas de Análise Microbiológica de Alimentos. 2009, 2ª ed. Faculdade de Química da UNAM. México. Versão para Administrador de Manuais e Documentos (AMyD) da Faculdade de Química da UNAM 1. Disponível em:
2. Britannia Laboratories. Água peptonada banhada. 2015. Disponível em: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Água peptonada. Disponível em: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Água peptonada. 2015. Disponível em: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Água peptonada tamponada. Disponível em: merckmillipore.com
6. Laboratórios Conda Pronadisa. Água peptonada alcalina. Disponível em: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.