CALDO LACTOSADO: BASE, PREPARAÇÃO E UTILIZAÇÕES - BIOLOGIA - 2025

O caldo de lactose é um meio de cultura líquido não seletivo usado principalmente como um pré-enriquecimento no isolamento de cepas de Salmonella de análises microbiológicas para alimentos processados, laticínios ou água. Isso é recomendado pela Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas para Alimentos (ICMPF).

O meio contém digestão enzimática de gelatina, extrato de carne e lactose, substâncias necessárias para o crescimento bacteriano. Além disso, a lactose é um carboidrato fermentável, portanto, alguns coliformes são capazes de quebrá-la com a produção de gás.

Caldos lactados com turvação. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa gil

Por esse motivo, o caldo de lactose é recomendado pela American Public Health Association (APHA) para o estudo presuntivo de bactérias coliformes totais e fecais, qualificando-o como uma excelente alternativa para substituir o caldo lauril sulfato de triptose na técnica padrão do Número Mais Provável (MPN).), utilizado para a análise microbiológica de amostras de alimentos, leite e águas residuais superficiais, subterrâneas, recreativas, domésticas e industriais.

Base

Para a análise microbiológica de algumas amostras, a etapa de pré-enriquecimento é essencial para poder recuperar um microrganismo específico que pode estar em quantidade muito baixa ou em condições desfavoráveis ​​que violem ou minimizem sua viabilidade.

É o caso de alimentos desidratados e processados, possivelmente contaminados com Salmonellas sp. Nestes casos, se a bactéria estiver presente, ela terá sofrido abusos físicos e químicos durante o processo de produção do produto.

De tal forma que os microrganismos ficam expostos a fatores adversos como desidratação, exposição a produtos inibidores ou tóxicos, sobreposição gerada pela presença de outras bactérias em maior quantidade, entre outros.

Nesse sentido, o caldo de lactose tem um efeito reparador nas estruturas danificadas do microrganismo, fazendo com que ele se recupere e se reproduza, de forma que possa ser detectado.

Da mesma forma, o caldo de lactose tem a capacidade de diluir as substâncias inibidoras que podem afetar sua viabilidade, permitindo seu desenvolvimento. Além disso, a composição nutricional do caldo de lactose é estratégica para favorecer o crescimento de Salmonella sp em relação a outros microrganismos.

Para identificação final, deve ser subcultivado em outros meios de cultura definitivos.

Por outro lado, a composição do meio também permite detectar microrganismos fermentadores de lactose que produzem gases.

Preparação

Para preparar um litro de caldo de lactose, 13 gramas do meio desidratado devem ser pesados ​​e dissolvidos em 1000 ml de água destilada.

Para ajudar a dissolver o meio na água, a solução pode ser aquecida um pouco, mas não muito.

Uma vez homogênea, a solução é preparada da seguinte maneira: se o caldo for utilizado para a busca de coliformes, é preparada uma prateleira com tubos de ensaio, onde é inserido um tubo de fermentação Durham de cabeça para baixo.

O tubo de Durham é um detalhe muito importante, pois permitirá a detecção da formação de gás, um dado de grande valor na busca de coliformes.

Uma vez que os tubos estão prontos, 10 ml do caldo de leite é dispensado neles, quantidade que deve ser suficiente para cobrir todo o tubo de Durham.

Se o caldo de lactose for usado como caldo de pré-enriquecimento, não é necessário colocar um tubo de fermentação Durham. Nesse caso, é necessária uma quantidade maior de meio (225 ml), que será servido em frascos de 500 ml, boca larga e com tampa de rosca termorresistente.

Posteriormente, os tubos ou frascos são autoclavados a 121 ° C por 15 minutos.

O meio deve permanecer em um pH final de 6,9 ​​± 0,2 a 25 ° C.

Os caldos são mantidos na geladeira até o uso.

Antes do uso, os caldos devem estar em temperatura ambiente.

Por outro lado, o caldo de lactose também pode ser preparado em dupla concentração.

Alguns laboratórios adicionam o bromocresol roxo ao caldo de lactose como indicador de pH, para mostrar os tubos onde a lactose foi fermentada devido à mudança de cor. Nesse caso, o caldo fica com a cor roxa e se houver fermentação fica amarelo.

Formulários

Em laboratórios de microbiologia, o caldo de lactose é amplamente utilizado por ser um meio relativamente barato que oferece resultados confiáveis ​​e rápidos (24-48 horas).

Pode ser usado para a análise de coliformes totais e fecais em alimentos e água ou como caldo de pré-enriquecimento para Salmonella.

Pré-enriquecimento

O pré-enriquecimento é uma etapa anterior ao enriquecimento da amostra, o que melhora muito a recuperação de bactérias do gênero Salmonella em alimentos processados.

Para isso, a amostra de alimento sólido (25 gramas) ou líquido (25 ml) é semeada em 225 ml de caldo de lactose, incubando-se por 24 a 48 horas. Posteriormente, será subcultivado em meio enriquecido, como caldo de selenito cistina ou caldo de tetrationato. Em seguida, vá para a mídia seletiva XLD e SS.

Análise de coliformes totais e fecais

É um excelente meio como indicador de contaminação fecal.

Por esse motivo, o caldo de lactose é ideal para a fase presuntiva do estudo dos coliformes pelo método do Número Mais Provável.

Para amostras em que haja suspeita de grande quantidade de coliformes, será inoculada uma quantidade menor (1ml), enquanto para amostras em que houver suspeita de menor quantidade de coliformes, inocular-se-á um volume maior de amostras (10 ml).

Para a análise, são feitas diluições de 10 ^-1, 10 ^-2, 10 ^-3, formando uma bateria de 3-5 tubos para cada concentração utilizada.

De cada diluição, o mesmo volume é semeado nos caldos de lactose.

Os tubos são incubados por 24 horas. Os caldos negativos são incubados por mais 24 horas.

A interpretação dos resultados é feita observando duas características: a primeira é a presença ou ausência de turbidez e como este meio não contém indicador de pH, não haverá alteração de cor.

A segunda é a produção ou não de gás. O gás é facilmente evidenciado no tubo de Durham pelo aparecimento de uma ou mais bolhas de ar dentro dele.

É considerado positivo se as duas características forem observadas, ou seja, turbidez com produção de gás. Os tubos positivos devem ser semeados novamente em meio de confirmação (caldo Bile Verde Brilhante a 2% e caldo EC).

Controle de qualidade do meio

- Ao preparar o meio, é importante não se esquecer de colocar os tubos de Durhams se a finalidade dos mesmos é estudar coliformes.

- Não superaqueça o meio antes de esterilizar.

- Distribuir em tubos de ensaio antes da esterilização, nunca depois.

- Não use se o meio tiver mais de 3 meses.

- Não use se observar alguma alteração nas características usuais do meio.

- Ao preparar um lote de caldo de lactose, teste sua qualidade semeando cepas conhecidas como Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii e Klebsiella pneumoniae. Eles crescem muito bem, com produção de gás (controle positivo).

- Também pode incluir Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium ou Enterococcus faecalis, que crescem bem, mas sem produção de gás (Controle Negativo).

- Deve-se notar que a cor original do meio desidratado é bege e a do meio preparado é amarelo muito claro e transparente. Se uma mudança na cor ou aparência for observada, ela pode se deteriorar.

Referências

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