CALDO DE SELENITA: BASE, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2025

O selenito é um meio de cultura líquido seletivo. Foi desenhado por Leifson para o enriquecimento de amostras onde se suspeite a presença de bactérias enteropatogênicas do gênero Salmonella.

Este meio atende aos requisitos da American Public Health Association (APHA), sendo, portanto, aceito para investigação da presença de Salmonella em amostras de fezes, urina, alimentos líquidos ou sólidos, água, entre outros.

Caldo de selenita. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa gil

Sua composição química favorece a recuperação desses microrganismos e por sua vez inibe o crescimento de outros. É principalmente tóxico para a maioria das bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae. No entanto, também permite a recuperação de cepas de Shigella e não inibe o crescimento de Pseudomonas e Proteus.

É composto de hidrogenosselenito de sódio anidro, fosfato de sódio anidro, peptonas e lactose. Há também uma variante à qual é adicionada cistina, daí seu nome caldo selenito-cistina.

Atualmente, o uso do caldo selenito-cistina é preferido, pois se obtém um percentual maior de recuperação de Salmonella, equivalente ao observado com outros meios seletivos para o mesmo fim, como o caldo tetrationato de sódio.

Base

As peptonas contidas no caldo servem como nutrientes para o bom desenvolvimento dos microrganismos. As cepas de Salmonella usam peptonas como fonte de nitrogênio, vitaminas e aminoácidos.

A lactose é o carboidrato fermentável, enquanto o selenito de sódio é a substância inibitória que impede o crescimento de bactérias Gram positivas e da maioria das bactérias presentes na flora intestinal, principalmente as da família Enterobacteriaceae. O fosfato de sódio é o tampão que estabiliza o pH do meio.

No caso da variante do caldo de selenito contendo L-cistina, este composto adicional é um agente redutor que minimiza a toxicidade do selenito, aumentando a recuperação de Salmonella.

Preparação

-Selenite caldo

Se você tem os componentes da mistura, você pode pesar:

4 g de selenito de hidrogênio de sódio anidro.

10 g de fosfato de sódio anidro.

5 g de peptonas.

4 gramas de lactose.

Dissolva os compostos em 1 litro de água destilada estéril. Pode ser aquecido ligeiramente para se dissolver completamente.

Alguns laboratórios expõem o meio por 10 minutos em vapor fluente para esterilizá-lo, pois não se deve usar autoclave. Se o meio for esterilizado, pode ser armazenado na geladeira até o uso.

Também pode ser preparado não estéril e servido direto de 10 a 15 ml em tubos de ensaio estéreis.

Neste caso, deve ser deixado em repouso e uso imediato. Como o meio não é estéril, não pode ser armazenado na geladeira para uso posterior.

- Preparação do ambiente comercial

Se o meio comercial estiver disponível, pese 23 g do meio desidratado e dissolva em um litro de água destilada estéril. Aqueça brevemente para terminar de dissolver. Não autoclave. Sirva assepticamente 10 ou 15 ml em tubos de ensaio estéreis.

O pH final do meio deve ser 7,0 ± 0,2.

Deve-se observar que a cor do meio desidratado é bege e o preparo é âmbar claro e translúcido.

Variante do caldo selenito-cistina

Ele contém os mesmos compostos que o caldo de selenita, mas são adicionados 10 mg de cistina. O resto do procedimento é exatamente igual ao descrito acima.

Formulários

Este meio é especial para uso em estudos epidemiológicos, nos casos em que a doença não se encontra em fase aguda, em pacientes assintomáticos ou em portadores saudáveis.

O isolamento do gênero Salmonella é geralmente difícil, pois geralmente são apenas amostras que contaminam pouco. Por ser em pequenas quantidades, é facilmente sobreposto pelo crescimento de outros gêneros bacterianos que são encontrados em maior quantidade.

Por outro lado, as matérias-primas com que são feitos os alimentos industrializados costumam estar expostas ao calor, processos de desidratação, uso de desinfetantes, radiação e conservantes, entre outros.

Portanto, as Salmonelas presentes na matéria-prima são maltratadas, submetendo o produto aos processos industriais mencionados. Da mesma forma, no caso de amostras clínicas como fezes, as cepas podem ser fracas se vierem de pacientes que foram tratados com antibióticos.

Portanto, qualquer amostra em que se suspeite a presença de Salmonella deve ser pré-enriquecida em caldo de lactose e, posteriormente, enriquecida em caldo de selenito para otimizar sua recuperação em meios seletivos, como ágar SS, ágar xilose, lisina desoxicolato (XLD), ágar entérico Hektoen (HE) e ágar verde brilhante, entre outros.

Semeado

Para amostras de fezes, pegue 1 g de amostra e suspenda em um tubo com 10 a 15 ml de caldo de selenito. Se as fezes forem líquidas, tomar 1 ml e suspender no caldo. Para esfregaços retais, descarregue o material do esfregaço no caldo.

Nas amostras de alimentos sólidos, retirar 1 gr e suspender no caldo de selenite.

Em alimentos líquidos, misture em partes iguais com o caldo de selenita na concentração dupla.

Para as amostras de urina, centrifugue, descarte o sobrenadante, retire todo o sedimento e suspenda no caldo de selenita.

Os caldos são incubados a 37 ° C durante 24 horas de incubação. O crescimento bacteriano é evidenciado pela turbidez. Um tubo adicional por amostra também pode ser incluído para incubação a 42 ° C. Posteriormente, semeadura de meio sólido seletivo do caldo de selenita.

Controle de qualidade

Para controlar a esterilidade, um caldo de selenito de cada lote não inoculado é incubado a 37 ° C por 24 horas. Espera-se que não haja turbidez ou mudança de cor do meio.

Cepas conhecidas podem ser usadas para controlar o funcionamento adequado do meio, como:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus mirabilis ATCC 43071.

Os resultados esperados são:

• Para as três primeiras cepas bacterianas, o crescimento deve ser satisfatório.
• Para inibição parcial de Escherichia coli.
• Para Proteus crescimento moderado.

Limitações

O meio de caldo de selenita é tóxico para a pele humana, portanto, o contato direto deve ser evitado.

Referências

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Comparação entre meios de cultura de selenito de sódio e tetrationato de sódio, ambos incubados a 37 ° C e 42 ° C durante o isolamento de Salmonella spp nas fezes de portadores. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Britannia Laboratories. Caldo Selenito. 2015. Disponível em: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Caldo de selenita. Disponível em: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Isolamento microbiológico de Salmonella spp. e ferramentas moleculares para sua detecção. Saúde, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Disponível em:
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.