CALDO DE TRIPTICASEÍNA DE SOJA: BASE, PREPARAÇÃO E USOS - BIOLOGIA - 2024

O triptona do caldo de soja é um meio de cultura líquido, altamente nutritivo e não seletivo. Por sua grande versatilidade, é um dos meios de cultura líquidos mais utilizados no laboratório de microbiologia.

É também conhecido pelo nome de caldo de soja tríptica ou caseína-soja digerida, cuja abreviatura é TSB por sua sigla em inglês Tryptic Soy Broth ou CST por sua sigla em espanhol. Seus usos são muito variados devido à sua composição. É composto de tripteína, peptona de soja, cloreto de sódio, fosfato dipotássico e glicose.

Caldo de tripticaseína de soja semeado com uma cepa de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 onde a produção de pigmento é observada. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

É capaz de reproduzir bactérias patogênicas clinicamente importantes, incluindo aquelas que são nutricionalmente exigentes e bactérias anaeróbias. Alguns fungos oportunistas e contaminantes também podem se desenvolver neste ambiente.

Devido ao seu alto poder nutricional, possui alta sensibilidade para detectar contaminação microbiana, por isso foi escolhido pelo Serviço de Inspeção de Sanidade Animal e Vegetal do USDA para a análise microbiológica de vacinas.

Da mesma forma, o caldo de tripticaseína soja atende aos requisitos das diferentes farmacopéias (EP europeia, JP japonesa e USP norte-americana) para o estudo microbiológico de produtos em nível industrial, como cosméticos e alimentos.

Por outro lado, vale ressaltar que apesar de sua grande utilidade, esse meio é relativamente barato, tornando-o acessível para a maioria dos laboratórios de microbiologia. Também é muito fácil de preparar.

Base

Tripteína, peptona e glicose fornecem propriedades nutricionais essenciais para torná-lo um meio ideal para o rápido crescimento microbiano.

Em aproximadamente 6 a 8 horas de incubação, o crescimento já pode ser visto na maioria dos microrganismos. No entanto, existem cepas de crescimento lento que podem levar dias para crescer.

O cloreto de sódio e o fosfato dipotássico atuam como equilíbrio osmótico e regulador do pH, respectivamente. A presença de crescimento é evidenciada pelo aparecimento de turbidez no meio; se não houver crescimento, o meio permanece translúcido.

Devido à sua cor clara, é possível observar a produção de pigmentos, como o mostrado na imagem do início do artigo, que corresponde ao pigmento produzido por Pseudomonas aeruginosa.

Preparação

-Triptysein soja caldo

Para preparar o caldo tríptico de soja, 30 g do meio comercial desidratado devem ser pesados ​​em balança digital. Em seguida, é dissolvido em um litro de água destilada contida em um frasco.

A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e depois levada a uma fonte de calor para ajudar na dissolução do meio. Deve ser mexido com freqüência enquanto fervura por 1 minuto.

Uma vez dissolvido, é distribuído em tubos de tamanho apropriado, conforme necessário. Podem ser usados ​​tubos com tampões de algodão ou com tampas de baquelite. Posteriormente, os tubos são esterilizados com o meio em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O pH do meio deve permanecer em 7,3 ± 0,2

Ressalta-se que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenado entre 10 a 35 ° C, em local seco. Já o caldo preparado é de cor âmbar claro e deve ser conservado no refrigerador (2 a 8 ° C).

-Variantes de caldo de tripticaseína de soja

O caldo de tripticaseína de soja modificado pode ser preparado pela adição de sais biliares e novobiocina para torná-lo seletivo para o isolamento de E. coli. Outra opção com o mesmo propósito é preparar caldo tripticase soja suplementado com vancomicina, cefixima e telurito (2,5 µg / ml).

Por outro lado, mais glicose (0,25%) pode ser adicionada ao caldo de soja tríptica quando o objetivo é estimular a formação de biofilmes.

Usar

É nutritivo o suficiente para permitir o crescimento de bactérias fastidiosas ou fastidiosas, como Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp e Brucella sp, sem a necessidade de suplementação com sangue ou soro.

Da mesma forma, alguns fungos podem se desenvolver neste caldo, como Candida albicans Complex, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Além disso, este meio em condições anaeróbias é ideal para a recuperação de bactérias do gênero Clostridium, bem como bactérias anaeróbias não esporuladas de importância clínica.

Se for adicionado cloreto de sódio a 6,5%, ele pode ser usado para o crescimento de Enterococcus e outros Streptococcus do Grupo D.

Em nível de pesquisa, tem sido muito útil em vários protocolos, especialmente no estudo de biofilme ou bactérias formadoras de biofilme. Também é usado para preparar a suspensão bacteriana de Mac Farland 0,5% necessária para a realização do antibiograma pelo método de Kirby e Bauer.

Neste caso, 3 a 5 colônias de aparência semelhante são retiradas e emulsionadas em 4-5 ml de caldo de tripticaseína de soja. Em seguida, é incubado por 2 a 6 horas a 35-37 ° C e subsequentemente ajustado para a concentração desejada usando solução salina estéril. Os caldos de tripticaseína de soja não devem ser usados ​​de 18 a 24 horas de incubação.

Semeado

A amostra pode ser semeada diretamente ou colônias puras retiradas de meios seletivos podem ser subcultivadas. O inóculo deve ser pequeno para não turvar o meio antes da incubação.

Normalmente é incubado a 37 ° C em aerobiose por 24 horas, mas essas condições podem variar dependendo do microrganismo procurado. Também pode ser incubado em condições anaeróbicas a 37 ° C por vários dias, se necessário. Por exemplo, microrganismos de crescimento rápido ou fastidiosos podem ser incubados por até 7 dias.

Na análise microbiológica de fármacos - como vacinas - os protocolos são mais rígidos. Nestes casos, o caldo sem crescimento não é descartado até atingir 14 dias de incubação contínua.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, 1 ou 2 tubos não inoculados devem ser incubados para demonstrar sua esterilidade. Deve permanecer inalterado.

Cepas conhecidas também podem ser plantadas para avaliar seu comportamento. Entre as cepas que podem ser utilizadas estão:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ou 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório nas condições adequadas de atmosfera e temperatura para cada microrganismo.

Limitações

-A fermentação da glicose provoca diminuição do pH do meio devido à produção de ácidos. Isso pode ser desfavorável para a sobrevivência de alguns microrganismos sensíveis à acidez.

-Não é recomendado para a manutenção de cepas, pois além da acidez, as bactérias esgotam os nutrientes após alguns dias com o conseqüente acúmulo de substâncias tóxicas que tornam o ambiente inóspito.

-Você deve trabalhar cuidando de todos os protocolos de esterilidade, pois os caldos são facilmente contaminados.

-Após preparar caldos de tripticaseína de soja, não se deve tentar transferir o caldo para outro tubo estéril, pois esse tipo de manobra é muito vulnerável à contaminação.

Referências

1. Cona E. Condições para um bom estudo de susceptibilidade pelo teste de difusão em ágar. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Disponível em: scielo.org
2. Laboratório Britannia. Caldo de tripteína de soja. 2015. Disponível em: britanialab.com
3. Laboratório MCD. Trypticasein Soy Broth. Disponível em: electronic-systems.com
4. Laboratório Neogen. Caldo de Soja Triptych. Disponível em: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Avaliação da técnica de imunoseparação magnética para a recuperação de Escherichia coli O157: H7 em cremes de leite. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Disponível em: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Formação de biofilme em isolados de Staphylococcus aureus de acordo com a susceptibilidade antimicrobiana e origem clínica. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Disponível em: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolamento de Escherichia coli O157: H7 em amostras de fezes bovinas de duplo propósito do município de Miranda, estado de Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Disponível em: scielo.org